二、核酸内切酶 核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内切酶仅水解5'磷酸二酯 键，把磷酸基团留在3'位置上，称为5'内切酶：而有些仅水解3'磷酸二酯键，把磷酸 基团留在5'位置上，称为3'-内切酶（图92）。还有一些核酸内切对磁酸酯键一侧的破 基有专一要求，例如胰脏核糖核酸酶(RNaseA)即是一种高度专一性核酸内切酶，它作 用于嘧啶核苷酸的C'上的磷酸根和相邻核苷酸的C'之间的键，产物为3'嘧啶单核苷酸 或以3'嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸（图9-3）。 3'内切酶5'内切酶 图9-2核酸内切酶的水解位置 内切酶 内切南 图93胰脏核酸内切酶的水解位置 20世纪0年代，在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶，能专一性地识别并水解双链 DNA上的特异核苷酸顺序，称为限制性核酸内切酶(m onuclease,简称生制) 当外源DNA侵入细菌后，限制性内切酶可将其水解切成片段，从而限制外 原DNA在细 菌细胞内的表达，而细菌本身的DNA由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰，不被 水解，从而得到保护。 近年来，限制性核酸内切酶的研究和应用发展很快，目前己提纯的限制性核酸内切酶 有100多种，许多已成为基因工程研究中必不可少的工具酶（可参阅第三章部分内容）。 限制性核酸内切酶可被分成三种类 I型和m型限制酶水解DNA需要消耗ATP 全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲 基基团 对DNA进行化学修饰的活性。 限制爾水解DNA不需要ATP也不以甲基化或其它方式修饰DNA,能在所识别的特殊核苷 酸顺序内或附近切制DNA。因此，被广泛用于DNA分子克隆和序列测定。部分限制性核 酸内切酶来源及识别位点见表91 280 280 二、核酸内切酶 核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内切酶仅水解 5′磷酸二酯 键，把磷酸基团留在 3′位置上，称为 5′-内切酶；而有些仅水解 3′-磷酸二酯键，把磷酸 基团留在 5′位置上，称为 3′-内切酶（图 9-2）。还有一些核酸内切酶对磷酸酯键一侧的碱 基有专一要求，例如胰脏核糖核酸酶（RNaseA）即是一种高度专一性核酸内切酶，它作 用于嘧啶核苷酸的 C′3上的磷酸根和相邻核苷酸的 C′5之间的键，产物为 3′嘧啶单核苷酸 或以 3′嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸（图 9-3）。 G A C U G A 3′ P P P P P P OH 5′ 3′内切酶 5′内切酶 图 9-2 核酸内切酶的水解位置 G 嘧啶 A 嘧啶 G A 3′ P P P P P P OH 5′ 内切酶 内切酶 图 9-3 胰脏核酸内切酶的水解位置 20 世纪 70 年代，在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶，能专一性地识别并水解双链 DNA 上的特异核苷酸顺序，称为限制性核酸内切酶（restriction endonuclease，简称限制酶）。 当外源 DNA 侵入细菌后，限制性内切酶可将其水解切成片段，从而限制了外源 DNA 在细 菌细胞内的表达，而细菌本身的 DNA 由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰，不被 水解，从而得到保护。 近年来，限制性核酸内切酶的研究和应用发展很快，目前已提纯的限制性核酸内切酶 有 100 多种，许多已成为基因工程研究中必不可少的工具酶（可参阅第三章部分内容）。 限制性核酸内切酶可被分成三种类型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶水解 DNA 需要消耗 ATP， 全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲基基团对 DNA 进行化学修饰的活性。Ⅱ型 限制酶水解 DNA 不需要 ATP 也不以甲基化或其它方式修饰 DNA，能在所识别的特殊核苷 酸顺序内或附近切割 DNA。因此，被广泛用于 DNA 分子克隆和序列测定。部分限制性核 酸内切酶来源及识别位点见表 9-1