7-3核酸的物理化学性质上册P502 (一)核酸的水解: 所有糖苷键和磷酸酯键都能被水解 (1)酸水解 糖苷键比磷酸二酯键易被水解,嘌呤碱糖苷键比嘧啶碱更易水解 (2)碱水解 磷酸酯键易水解,RNA比DNA易水解,因为RNA核糖上有2-OH,水解过 程见P502。 (3)酶水解 为水解磷酸二酯键的酶,专一水解核酸的为核酸酶。 核酸酶的分类 按底物专一性分为RNasε(核糖核酸酶)和 DNase(脱氧核糖核酸酶)。 按对底物作用方式分为内切酶(作用点在核糖核酸酶内部)和外切酶(作用 点在末端)。 2. RNase:如牛胰核糖核酸酶(EC2.7.7.16),内切酶,作用位点为嘧啶核苷(Py) 3-磷酸与其他核苷酸之间的连键。 3.限制性内切酶:为 DNase 剪裁DNA的工具,可用于核酸测序和基因工程。 在细菌中发现,目前已找到限制性内切酶数千种。限制性内切酶往往与甲基 化酶成对存在,自身酶作用位点的碱基被甲基化,内切酶不再降解,因而可 识别和降解外源DNA。 断裂位点处常有二重旋转(轴)对称性(回文结构,正读反读相同),在特定 位点两条链切断后形成粘末端或平末端 限制性内切酶命名:如E.coRI,第1个字母E(大写),为大肠杆菌(E.coli) 属名的第一个字母,第2、3两个字母co(小写)为种名头两个字母,第4 个字母R,表示菌株,最后一个罗马字为该细菌中已分离这一类酶的编号。 (二)核酸的酸碱性质: 核苷和核苷酸都是兼性离子,碱基和磷酸基均能解离,见P505,具有酸碱性 由于DNA酸碱变性,使酸碱滴定曲线不可逆 (三)核酸的紫外吸收: 嘌呤环与嘧啶环具有共轭双键,核苷和核酸的吸收波段在240~290m,最大吸 攸值在260nm附近(蛋白质最大吸收值280nm)。 (1)可用于测样品纯度(测吸光度A): A260/A280比值,纯DNA应大于1.8,纯RNA应达到20,若样品混有杂 蛋白,比值明显降低 对于纯样品,从260m的A值即可算出含量。A值为1,相当于50μg/mL DNA双螺旋,或40μgmL单链DNA(或RNA,或20ug/mL寡核苷酸 (2)核酸的摩尔磷吸光系数ε(P):为含有1克原子磷(30.98g)的核酸在260nm 处的吸光系数 e(P)=A/CL.=30.98A/WL A:吸收值,C:每升溶液的磷摩尔数,C=W/30.98,L:比色杯内径。 一般天然DNAE(P)为6600,RNA为7700~7800 由于双螺旋结构使碱基对的π电子云发生重叠,使紫外吸收比单链减少, 由此可判断DNA是否变性7-3 核酸的物理化学性质 上册 P502 （一） 核酸的水解： 所有糖苷键和磷酸酯键都能被水解。 （1） 酸水解： 糖苷键比磷酸二酯键易被水解，嘌呤碱糖苷键比嘧啶碱更易水解。 （2） 碱水解： 磷酸酯键易水解，RNA 比 DNA 易水解，因为 RNA 核糖上有 2 ‘ -OH，水解过 程见 P502。 （3） 酶水解： 为水解磷酸二酯键的酶，专一水解核酸的为核酸酶。 1. 核酸酶的分类： 按底物专一性分为 RNase（核糖核酸酶）和 DNase（脱氧核糖核酸酶）。 按对底物作用方式分为内切酶（作用点在核糖核酸酶内部）和外切酶（作用 点在末端）。 2. RNase：如牛胰核糖核酸酶（EC 2.7.7.16），内切酶，作用位点为嘧啶核苷（Py） -3 ‘ -磷酸与其他核苷酸之间的连键。 3. 限制性内切酶：为 DNase。 剪裁 DNA 的工具，可用于核酸测序和基因工程。 在细菌中发现，目前已找到限制性内切酶数千种。限制性内切酶往往与甲基 化酶成对存在，自身酶作用位点的碱基被甲基化，内切酶不再降解，因而可 识别和降解外源 DNA。 断裂位点处常有二重旋转（轴）对称性（回文结构，正读反读相同），在特定 位点两条链切断后形成粘末端或平末端。 限制性内切酶命名：如 E. coR Ⅰ，第 1 个字母 E(大写)，为大肠杆菌(E.coli) 属名的第一个字母，第 2、3 两个字母 co（小写）为种名头两个字母，第 4 个字母 R，表示菌株，最后一个罗马字为该细菌中已分离这一类酶的编号。 （二） 核酸的酸碱性质： 核苷和核苷酸都是兼性离子，碱基和磷酸基均能解离，见 P505，具有酸碱性。 由于 DNA 酸碱变性，使酸碱滴定曲线不可逆。 （三） 核酸的紫外吸收： 嘌呤环与嘧啶环具有共轭双键，核苷和核酸的吸收波段在 240~290nm，最大吸 收值在 260nm 附近（蛋白质最大吸收值 280nm）。 （1） 可用于测样品纯度（测吸光度 A）： A260/A280 比值，纯 DNA 应大于 1.8，纯 RNA 应达到 2.0，若样品混有杂 蛋白，比值明显降低。 对于纯样品，从 260nm 的 A 值即可算出含量。A 值为 1，相当于 50μg/mL DNA 双螺旋，或 40μg/mL 单链 DNA（或 RNA），或 20μg/mL 寡核苷酸。 （2） 核酸的摩尔磷吸光系数ε（P）：为含有 1 克原子磷（30.98g）的核酸在 260nm 处的吸光系数。 ε（P）= A / CL. = 30.98 A / W L A：吸收值， C：每升溶液的磷摩尔数，C=W/30.98， L：比色杯内径。 一般天然 DNA ε（P）为 6600，RNA 为 7700~7800 由于双螺旋结构使碱基对的π电子云发生重叠，使紫外吸收比单链减少， 由此可判断 DNA 是否变性