DNA变性时ε(P)值升高,增色效应。 DNA复性时ε(P)值降低,减色效应。 核酸比所含核苷酸单体的ε(P)低40~45% (四)核酸的变性、复性及杂交 (1)变性:核酸双螺旋区的氢键断裂变成单链,不涉及共价键的断裂 降解:多核苷酸骨架上共价键(3,5-磷酸二酯键)断裂,分子量降低。 引起变性因素:热变性,酸碱变性,变性剂(如尿素,甲醛等)变性(竞争形 成氢键) DNA变性温度:又称熔点或熔解温度,为DNA双螺旋结构失去一半时的 温度,用Tm表示,DNA的Tm一般为82~95。DNA变性是爆发式的,变性 在一个很窄温度范围内发生 P508图144为DNA变性过程。 影响Tm的因素: 1.DNA的均一性:均一则Tm窄,如poly(A-T), poly d(G-C)等,Tm窄。 2.G-C含量:Tm值与G-C含量成正比,G-C含量越高,Tm值越高,因为 G-C间三个氢键。 G-C含量与Tm关系的经验公式 G-C%=(Tm-693)×2.44 可由G-C含量计算Tm或由Tm计算G-C含量 3.介质离子强度 离子强度较高时,DNA的Tm值较高,DNA较稳定,因此DNA的保存在 含盐(如1 mol NaCl)缓冲溶液中 RNA的变性:RNA分子中有局部双螺旋区,所以也可发生变性,只是Tm值 较低,且范围较宽 双链RNA变性几乎与DNA同。 (2)复性:变性DNA在适当条件下,两条彼此分开的链重新缔合成双螺旋结构的 过程称为复性 变性DNA在缓慢冷却时,可以复性的过程称为退火。加热变性的DNA为 防止复性,需骤冷处理。 DNA复性,浓度越大复性越快,且具有多重复序列的复性快。 (3)核酸的杂交:不同来源的DNA热变性后慢慢冷却,若异源DNA之间某些区域 有相同序列,则复性时会形成杂交DNA分子。 DNA与互补的RNA之间也可发生杂交。 核酸杂交应用广泛,可用来检测特殊核苷酸序列的一个或更多的DNA片 断,将少量基因钓出,是基因芯片,基因探针的工作根据DNA 变性时ε（P）值升高，增色效应。 DNA 复性时ε（P）值降低，减色效应。 核酸比所含核苷酸单体的ε（P）低 40~45%。 （四） 核酸的变性、复性及杂交： （1） 变性：核酸双螺旋区的氢键断裂变成单链，不涉及共价键的断裂。 降解：多核苷酸骨架上共价键（3 ‘，5 ‘ -磷酸二酯键）断裂，分子量降低。 引起变性因素：热变性，酸碱变性，变性剂（如尿素，甲醛等）变性（竞争形 成氢键）。 DNA 变性温度：又称熔点或熔解温度，为 DNA 双螺旋结构失去一半时的 温度，用 Tm表示，DNA 的 Tm一般为 82~950C。DNA 变性是爆发式的，变性 在一个很窄温度范围内发生。 P508 图 14-4 为 DNA 变性过程。 影响 Tm的因素： 1. DNA 的均一性：均一则 Tm窄，如 poly (A-T)， poly d(G-C)等， Tm窄。 2. G-C 含量：Tm 值与 G-C 含量成正比，G-C 含量越高，Tm 值越高，因为 G-C 间三个氢键。 G-C 含量与 Tm关系的经验公式： G-C% = (Tm - 69.3) ×2.44 可由 G-C 含量计算 Tm或由 Tm计算 G-C 含量。 3. 介质离子强度： 离子强度较高时，DNA 的 Tm值较高，DNA 较稳定，因此 DNA 的保存在 含盐（如 1mol NaCl）缓冲溶液中。 RNA 的变性：RNA 分子中有局部双螺旋区，所以也可发生变性，只是 Tm值 较低，且范围较宽 双链 RNA 变性几乎与 DNA 同。 （2） 复性：变性 DNA 在适当条件下，两条彼此分开的链重新缔合成双螺旋结构的 过程称为复性。 变性 DNA 在缓慢冷却时，可以复性的过程称为退火。加热变性的 DNA 为 防止复性，需骤冷处理。 DNA 复性，浓度越大复性越快，且具有多重复序列的复性快。 （3） 核酸的杂交：不同来源的 DNA 热变性后慢慢冷却，若异源 DNA 之间某些区域 有相同序列，则复性时会形成杂交 DNA 分子。 DNA 与互补的 RNA 之间也可发生杂交。 核酸杂交应用广泛，可用来检测特殊核苷酸序列的一个或更多的 DNA 片 断，将少量基因钓出，是基因芯片，基因探针的工作根据