2、*单倍体细胞培养及育种利用：(1)单倍体细胞培养在遗传和有种中的应用价值：(2) 离体培养条件下的小孢子发育：(3)影响花药培养的因素：(4)花粉（小孢子）培养：(5) 单倍体诱导中存在的问题：(6)单倍体细胞培养与植物育种。 3、幼胚培养与远缘杂交育种。 4、种质的长期保存。 5、脱毒及繁殖重要品种或材料。 6、人工种子的生产。 二、植物原生质体培养和体细胞杂交 1、原生质体的分离：分离方法、影响原生质体分离的因素、原生质体的收集、纯化和 活力测定。 2、原生质体培养 3、细胞融合（体细胞杂交）：(1)融合方法：(2)融合方式：(3)杂种细胞的筛选：(4) 杂种的鉴定：(5)细胞融合与作物有种。 第二节转基因育种 一、转基因技术的发展现状 国际转基因植物研究与现状：我国转基因作物研究与利用概况 二、*转基因育种的程序 1、目的基因的获得：(1)根据基因表达的产物一蛋白进行基因克隆，(2)从基因组DA 或RNA序列克隆基因（同源序列法、表达序列标签法、根据连锁图谱克隆目的基因、转座 子标签法、差异显示法)。 2、目的基因重组质粒的构建。 3、受体材料的选择：良好的植物基因转化受体系统应满足的条件：常用的受体材料的 类型。 4、转基因方法的确定和外源基因的转化：(1)裁体介导转移系统：(2)外源基因直接 导入法。 5、转化体的筛选和鉴定。 6、转化体的安全性评价和育种利用 三、转基因作物品种的选育 1、转基因作物有种目标的制定。 2、转基因方法的确定及转基因植株的获得。 3、转基因作物品种的选有：(1)纯系有种：(2)回交有种：(3)杂交有种：(4)杂种 品种。 四、转基因作物的生物安全性 第三节分子标记辅助选择育种 一、*分子标记的类型和特点 1、以分子杂交为基础的DNA标记技术。 2、以聚合酶链式反应为基础的各种DNA指纹技术：①单引物PCR标记：②双引物选 择性扩增的PCR标记：③需要通过克隆、测序来构建特殊双引物的PCR标记。 3、新型的分子标记：如单核苷酸多态性(SNP),表达序列标签(EST)。 二、常用分子标记的原理和遗传特性 1、RFLP:(1)RFLP标记的原理：(2)RFLP标记的特点。 2、AFLP:(1)AFLP标记的原理：(2)AFLP分析的基本步骤：(3)AFLP标记的特点。 1414 2、*单倍体细胞培养及育种利用：（1）单倍体细胞培养在遗传和育种中的应用价值；（2） 离体培养条件下的小孢子发育；（3）影响花药培养的因素；（4）花粉（小孢子）培养；（5） 单倍体诱导中存在的问题；（6）单倍体细胞培养与植物育种。 3、幼胚培养与远缘杂交育种。 4、种质的长期保存。 5、脱毒及繁殖重要品种或材料。 6、人工种子的生产。 二、植物原生质体培养和体细胞杂交 1、原生质体的分离：分离方法、影响原生质体分离的因素、原生质体的收集、纯化和 活力测定。 2、原生质体培养。 3、细胞融合（体细胞杂交）：（1）融合方法；（2）融合方式；（3）杂种细胞的筛选；（4） 杂种的鉴定；（5）细胞融合与作物育种。 第二节 转基因育种 一、转基因技术的发展现状 国际转基因植物研究与现状；我国转基因作物研究与利用概况。 二、*转基因育种的程序 1、目的基因的获得：（1）根据基因表达的产物—蛋白进行基因克隆，（2）从基因组 DNA 或 mRNA 序列克隆基因（同源序列法、表达序列标签法、根据连锁图谱克隆目的基因、转座 子标签法、差异显示法）。 2、目的基因重组质粒的构建。 3、受体材料的选择：良好的植物基因转化受体系统应满足的条件；常用的受体材料的 类型。 4、转基因方法的确定和外源基因的转化：（1）载体介导转移系统；（2）外源基因直接 导入法。 5、转化体的筛选和鉴定。 6、转化体的安全性评价和育种利用。 三、转基因作物品种的选育 1、转基因作物育种目标的制定。 2、转基因方法的确定及转基因植株的获得。 3、转基因作物品种的选育：（1）纯系育种；（2）回交育种；（3）杂交育种；（4）杂种 品种。 四、转基因作物的生物安全性 第三节 分子标记辅助选择育种 一、*分子标记的类型和特点 1、以分子杂交为基础的 DNA 标记技术。 2、以聚合酶链式反应为基础的各种 DNA 指纹技术：①单引物 PCR 标记；②双引物选 择性扩增的 PCR 标记；③需要通过克隆、测序来构建特殊双引物的 PCR 标记。 3、新型的分子标记：如单核苷酸多态性（SNP），表达序列标签（EST）。 二、常用分子标记的原理和遗传特性 1、RFLP：（1）RFLP 标记的原理；（2）RFLP 标记的特点。 2、AFLP：（1）AFLP 标记的原理；（2）AFLP 分析的基本步骤；（3）AFLP 标记的特点