品中的大分子不能进入凝胶颗粒内，而在洗脱中随着外水体积下行，最早过柱，其洗脱 体积=V 外。 可以进胶的颗粒（分子）中，大的在胶颗粒中受阻大，常离开颗粒进入颗粒之外， 也就是说，它们在胶颗粒内运行时间短，因此也被先洗脱下来。更小的分子在胶颗粒中 运行距离长，停留时间也长，后于可进胶的大分子而依次被洗脱。最小的分子在胶颗粒 中运行距离最长，停留时间也最长，最后被洗脱出来。最小分子的洗脱体积=V 外+V 内， （实际洗脱体积会更大些，因为蛋白质分子在 Sephadex 中除受分子筛效应外，还有一 些空间的相互作用而影响洗脱体积）。 （二）、注意事项： 1． 要根据所需纯化物质的分子量选择胶的孔径，见讲义。 2． 胶要充分澎涨，并去掉小颗粒。 3． 装柱要均一，胶面要平整，柱不能留有气泡（包括死空间）。否则得重装。 4． 装完后上样前要用洗脱液平衡 2 倍体积以上。 5． 要稳压，视所选择的胶的不同控制洗脱液排出口与洗脱瓶之间的高度差，并控 制洗脱速度。 6． 使用过的柱用 2 倍洗脱液平衡后可再上柱使用。 7． 为防长霉，洗脱液要含 0.1‰的叠氮钠。 8． 澎涨后的胶要长期保存，应放置于 4℃冰箱，并含 NaN3。 9． 需核酸蛋白质检测仪、部分收集仪和记录仪的使用说明书。 （三）、所获的纯化蛋白质可继续研究的内容： 1． 通过生物质谱进行蛋白质的序列分析，并通过信息软件，了解该蛋白质的功能， 与其他生物同类蛋白质进行比较，进行定量分析，大小，PI 分析。 2． 若为酶类的蛋白还可以进行酶最适 PH，温度，离子类型及浓度，抑制剂种类及 最低抑制浓度分析，酶反应动力学研究，竞争抑制类型研究，化学修饰分析。（要 求通过查阅资料进行实验设计） 3． 可以结晶进行园二色性，X 光衍射，顺磁，核磁共振谱研究—— 三维结构研究。品中的大分子不能进入凝胶颗粒内，而在洗脱中随着外水体积下行，最早过柱，其洗脱 体积=V 外。 可以进胶的颗粒（分子）中，大的在胶颗粒中受阻大，常离开颗粒进入颗粒之外， 也就是说，它们在胶颗粒内运行时间短，因此也被先洗脱下来。更小的分子在胶颗粒中 运行距离长，停留时间也长，后于可进胶的大分子而依次被洗脱。最小的分子在胶颗粒 中运行距离最长，停留时间也最长，最后被洗脱出来。最小分子的洗脱体积=V 外+V 内， （实际洗脱体积会更大些，因为蛋白质分子在 Sephadex 中除受分子筛效应外，还有一 些空间的相互作用而影响洗脱体积）。 （二）、注意事项： 1． 要根据所需纯化物质的分子量选择胶的孔径，见讲义。 2． 胶要充分澎涨，并去掉小颗粒。 3． 装柱要均一，胶面要平整，柱不能留有气泡（包括死空间）。否则得重装。 4． 装完后上样前要用洗脱液平衡 2 倍体积以上。 5． 要稳压，视所选择的胶的不同控制洗脱液排出口与洗脱瓶之间的高度差，并控 制洗脱速度。 6． 使用过的柱用 2 倍洗脱液平衡后可再上柱使用。 7． 为防长霉，洗脱液要含 0.1‰的叠氮钠。 8． 澎涨后的胶要长期保存，应放置于 4℃冰箱，并含 NaN3。 9． 需核酸蛋白质检测仪、部分收集仪和记录仪的使用说明书。 （三）、所获的纯化蛋白质可继续研究的内容： 1． 通过生物质谱进行蛋白质的序列分析，并通过信息软件，了解该蛋白质的功能， 与其他生物同类蛋白质进行比较，进行定量分析，大小，PI 分析。 2． 若为酶类的蛋白还可以进行酶最适 PH，温度，离子类型及浓度，抑制剂种类及 最低抑制浓度分析，酶反应动力学研究，竞争抑制类型研究，化学修饰分析。（要 求通过查阅资料进行实验设计） 3． 可以结晶进行园二色性，X 光衍射，顺磁，核磁共振谱研究—— 三维结构研究