6．蛋白质在电泳中的泳动行为： 电泳启动时，蛋白样品处于 PH6.7 的上层，蛋白之上 PH8.3，PH6.7 层之下为 PH8.9 的分离胶层，上槽为负极，下槽为正极。 出现了 PH 不连续和胶孔径大小不连续：启动时 Cl¯解离度大，Pro¯解离度居中， 甘 aaCOO¯解离度小，迁移顺序为（PH6.7）Cl¯> Pro¯ >—COO¯。在 Cl¯与 Pro¯之间和 Pro¯与—COO¯之间都将出现低离子区，同时也出现高电势，高电势迫使 Pro¯向 Cl¯迁 移，—COO¯向 Pro¯迁移。 如：一个 Cl¯领路，—COO¯推动。 在浓缩胶运动中，由于胶联度小，孔径大，Pro¯受阻小，因此不同的蛋白质就浓缩 到分离胶之上成层，起浓缩效应，使全部蛋白质处于同一起跑线上。 当蛋白质进入分离胶时，此时 Pro¯，Cl¯，甘 aa 离子在 PH8.9 的溶液中，Cl¯完全 电离而很快到达正极，甘 aa 电离度加大很快跃过蛋白质，而到达正极，只有蛋白质分 子在分离胶中较为缓慢的移动。 由于 Pro¯在电泳过程中，受到溶液离子的变化而 PH 值发生变化，但每一瞬间， 其所带电荷数除以单位质量是不同的，所以带负电荷多者迁移快，反之则慢，这就出 现了电荷效应。 由于胶孔径小，而且成为一个整体的筛状结构，它们对大分子阻力大，小分子阻 力小，起着分子筛效应，也就是蛋白质在分离胶中，以分子筛效应和电荷效应而出现 迁移率的差异，最终达到彼此分开，并用 R250 染色而加以显示出来。 八、透析： 是一种把样品置于一个具有一定大小孔径的袋中，并且于水或缓冲液放置，让 小分子物质与目的大分子彼此分开的过程。 透析袋有现成的商品，可从公司购买。一般可去样 3000dl 以下的分子，可以用 于脱盐而改变目的物的状态。如：（NH4）2SO4 盐析所得的沉淀物，变成可溶性目的 物，排除离子的干扰，保持目的物的生理活性。 注意事项： 1． 装袋前要对袋（管）查漏，以防样品流失。 2． 透析管两部或袋上端要留下一定的空间，以防止水进入袋后涨破。 3． 袋要扎紧以防流失。 4． 置水或缓冲液时，包扎处最好要高离液面。 5． 置 4℃冰箱透析以防变性。 6． 最好是多换透析液（4h，24h）。 7． 要用相应的方法检查透析是否完全，如奈氏试剂查 NH4，BaCl2 查 SO4 2-等。 8． 要出后把袋外水液用滤纸吸干。 九、Sephadex G100 的工作原理： （一）、Sephadex G100 的结构示意图，主要参数： 成为颗粒状，装于玻璃柱内，颗粒内及之间为缓冲液所占据。 从柱管底部与胶颗粒交界面至柱上端胶面，所范围的体积称为柱床体积 V0 。 胶颗粒与颗粒之间的缓冲液体积称为外水体积 V 外。 颗粒内的缓冲液所占据的体积称为内水体积 V 内。 胶面以下的部分空间（包括承接管）称为死空间——越小越好。 V0=V 外+V 内+胶体积。 蛋白质样品小心地铺展于胶面，待样品进胶后用洗脱缓冲液洗涤柱内壁，待洗涤液 进胶后，再补加洗涤液至柱满为止，打开止水夹，开始洗脱。此时，一个混合蛋白质样6．蛋白质在电泳中的泳动行为： 电泳启动时，蛋白样品处于 PH6.7 的上层，蛋白之上 PH8.3，PH6.7 层之下为 PH8.9 的分离胶层，上槽为负极，下槽为正极。 出现了 PH 不连续和胶孔径大小不连续：启动时 Cl¯解离度大，Pro¯解离度居中， 甘 aaCOO¯解离度小，迁移顺序为（PH6.7）Cl¯> Pro¯ >—COO¯。在 Cl¯与 Pro¯之间和 Pro¯与—COO¯之间都将出现低离子区，同时也出现高电势，高电势迫使 Pro¯向 Cl¯迁 移，—COO¯向 Pro¯迁移。 如：一个 Cl¯领路，—COO¯推动。 在浓缩胶运动中，由于胶联度小，孔径大，Pro¯受阻小，因此不同的蛋白质就浓缩 到分离胶之上成层，起浓缩效应，使全部蛋白质处于同一起跑线上。 当蛋白质进入分离胶时，此时 Pro¯，Cl¯，甘 aa 离子在 PH8.9 的溶液中，Cl¯完全 电离而很快到达正极，甘 aa 电离度加大很快跃过蛋白质，而到达正极，只有蛋白质分 子在分离胶中较为缓慢的移动。 由于 Pro¯在电泳过程中，受到溶液离子的变化而 PH 值发生变化，但每一瞬间， 其所带电荷数除以单位质量是不同的，所以带负电荷多者迁移快，反之则慢，这就出 现了电荷效应。 由于胶孔径小，而且成为一个整体的筛状结构，它们对大分子阻力大，小分子阻 力小，起着分子筛效应，也就是蛋白质在分离胶中，以分子筛效应和电荷效应而出现 迁移率的差异，最终达到彼此分开，并用 R250 染色而加以显示出来。 八、透析： 是一种把样品置于一个具有一定大小孔径的袋中，并且于水或缓冲液放置，让 小分子物质与目的大分子彼此分开的过程。 透析袋有现成的商品，可从公司购买。一般可去样 3000dl 以下的分子，可以用 于脱盐而改变目的物的状态。如：（NH4）2SO4 盐析所得的沉淀物，变成可溶性目的 物，排除离子的干扰，保持目的物的生理活性。 注意事项： 1． 装袋前要对袋（管）查漏，以防样品流失。 2． 透析管两部或袋上端要留下一定的空间，以防止水进入袋后涨破。 3． 袋要扎紧以防流失。 4． 置水或缓冲液时，包扎处最好要高离液面。 5． 置 4℃冰箱透析以防变性。 6． 最好是多换透析液（4h，24h）。 7． 要用相应的方法检查透析是否完全，如奈氏试剂查 NH4，BaCl2 查 SO4 2-等。 8． 要出后把袋外水液用滤纸吸干。 九、Sephadex G100 的工作原理： （一）、Sephadex G100 的结构示意图，主要参数： 成为颗粒状，装于玻璃柱内，颗粒内及之间为缓冲液所占据。 从柱管底部与胶颗粒交界面至柱上端胶面，所范围的体积称为柱床体积 V0 。 胶颗粒与颗粒之间的缓冲液体积称为外水体积 V 外。 颗粒内的缓冲液所占据的体积称为内水体积 V 内。 胶面以下的部分空间（包括承接管）称为死空间——越小越好。 V0=V 外+V 内+胶体积。 蛋白质样品小心地铺展于胶面，待样品进胶后用洗脱缓冲液洗涤柱内壁，待洗涤液 进胶后，再补加洗涤液至柱满为止，打开止水夹，开始洗脱。此时，一个混合蛋白质样