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.194 北京科技大学学报 第29卷 经过C。0辐照消毒灭菌，将制备好的材料密封于无 样先在20士2℃的温度下充分浸水，然后使水温逐 菌塑料袋中备用 渐上升，维持2℃min的升温速率，不断轻轻搅动 1.2.2光学显微镜观察14 水，令其缓慢而均匀地流动，直到试样开始收缩，立 (1)HE染色.将待检测试样浸泡在10%甲醛 即记下温度， 溶液中，室温放置24h.随后，每块试样如图1所示 1.2.7体外降解时间的测定] 切取大小为1cm×1cm的两块，分别进行平切、纵 准确称取2mg支架材料置于盛有1.9 mL Tris 切，然后将试样依次用自来水和蒸馏水清洗， CaCl2缓冲溶液(pH7.6)的试管中，然后加入新配 一24℃下冰冻3h.再依次用戊二醛和四氧化饿固 制的2mL(100 Units)胶原酶溶液，将试管置于37℃ 定.将固定处理后的试样切成15~20m的薄片粘 的环境中温育，定时观察，每次三个平行实验，记下 在载玻片一侧，并进行干燥.将干燥好的切片进行 样品完全澄清的时间，取平均值 HE染色，染色处理后的切片在光镜下观察， 2结果与讨论 2.1H亚染色光镜检测 取典型试样进行HE染色光镜观察，比较处理 前后成纤维细胞的脱除情况，根据染色原理可知胶 原纤维呈红色（或粉红色小），细胞呈深褐色（或蓝 紫色).观察结果如下. 图1取样示意图 图2显示，裸皮中存在着很集中的深蓝色物质， Fig.1 Schematic diagram of sampling 根据染色原理其为成纤维细胞成分，周围紫红色的 (2)脂肪染色，将干燥好的切片依次用蒸馏 纤维组织是胶原纤维，该图显示了胶原纤维结构稠 水、70%酒精、苏丹N、70%酒精、蒸馏水处理，最后 密并存在许多成纤维细胞 封固处理，光镜观察封固处理后的切片， 1.2.3扫描电镜观察 将试样切成小块并进行双重固定，清洗，叔丁醇 逐级脱水，真空冷冻干燥脱水和喷金导电处理后，做 水平和垂直切片，扫描电镜观察支架材料表面及内 部的微观结构· 1.2.4透水汽性能的测定1时] 采用类似Aiba法的杯水法测定，取2cm的试 管，装满生理盐水，使膜与液面接触，中间不留空隙， 并沿试管侧面密封称重，得Mo(g),然后将体系放入 36士1℃的干燥器里，24h后称其重，得M1,并测试 图2未经处理的裸皮，平切，HE染色 管的内切面积S(m),透水汽率Rw按下式计算： Fig.2 Unprocessed naked skin,flat cutting.HE dyeing Rw=(Mo-M1)/S (1) 图3和图4显示，试样经处理后，均保留了较完 1.2.5拉伸强度的测定16] 参照GB13022-91.试样在含水量相同的情况 下测定，夹头分离速度大约为100士10 mm'min1, 记下试样断裂时的张力F(N),并测试样的横截面 积S(mm2).拉伸强度Ts用下式计算： Ts=F/S (2) 1.2.6收缩温度的测定16] 用测收缩温度仪测定，检验胶原的交联度，若发 生交联则收缩温度会升高，取样50mmX3mm(试 样厚度小于3mm),如果收缩温度在60℃以下，加 图3处理后试样，平切，HE染色 入烧杯里的水温必须低于收缩温度10℃以上.试 Fig.3 Processed sample,flat cutting.HE dyeing经过 Co 60辐照消毒灭菌．将制备好的材料密封于无 菌塑料袋中备用． 1∙2∙2 光学显微镜观察［14］ （1） HE 染色．将待检测试样浸泡在10％甲醛 溶液中室温放置24h．随后每块试样如图1所示 切取大小为1cm×1cm 的两块分别进行平切、纵 切．然 后 将 试 样 依 次 用 自 来 水 和 蒸 馏 水 清 洗 －24℃下冰冻3h．再依次用戊二醛和四氧化锇固 定．将固定处理后的试样切成15～20μm 的薄片粘 在载玻片一侧并进行干燥．将干燥好的切片进行 HE 染色．染色处理后的切片在光镜下观察． 图1 取样示意图 Fig．1 Schematic diagram of sampling （2） 脂肪染色．将干燥好的切片依次用蒸馏 水、70％酒精、苏丹Ⅳ、70％酒精、蒸馏水处理最后 封固处理．光镜观察封固处理后的切片． 1∙2∙3 扫描电镜观察 将试样切成小块并进行双重固定清洗叔丁醇 逐级脱水真空冷冻干燥脱水和喷金导电处理后做 水平和垂直切片扫描电镜观察支架材料表面及内 部的微观结构． 1∙2∙4 透水汽性能的测定［15］ 采用类似 Aiba 法的杯水法测定取●2cm 的试 管装满生理盐水使膜与液面接触中间不留空隙 并沿试管侧面密封称重得 M0（g）然后将体系放入 36±1℃的干燥器里24h 后称其重得 M1．并测试 管的内切面积 S（m 2）．透水汽率 RW 按下式计算： RW＝（ M0－ M1）／S （1） 1∙2∙5 拉伸强度的测定［16］ 参照 GB13022－91．试样在含水量相同的情况 下测定夹头分离速度大约为100±10mm·min －1 记下试样断裂时的张力 F（N）并测试样的横截面 积 S（mm 2）．拉伸强度 TS 用下式计算： TS＝F／S （2） 1∙2∙6 收缩温度的测定［16］ 用测收缩温度仪测定检验胶原的交联度若发 生交联则收缩温度会升高．取样50mm×3mm（试 样厚度小于3mm）如果收缩温度在60℃以下加 入烧杯里的水温必须低于收缩温度10℃以上．试 样先在20±2℃的温度下充分浸水然后使水温逐 渐上升维持2℃·min －1的升温速率不断轻轻搅动 水令其缓慢而均匀地流动直到试样开始收缩立 即记下温度． 1∙2∙7 体外降解时间的测定［15］ 准确称取2mg 支架材料置于盛有1∙9mL Tris －CaCl2 缓冲溶液（pH7∙6）的试管中然后加入新配 制的2mL（100Units）胶原酶溶液将试管置于37℃ 的环境中温育定时观察每次三个平行实验记下 样品完全澄清的时间取平均值． 2 结果与讨论 2∙1 HE 染色光镜检测 取典型试样进行 HE 染色光镜观察比较处理 前后成纤维细胞的脱除情况．根据染色原理可知胶 原纤维呈红色（或粉红色［17］ ）细胞呈深褐色（或蓝 紫色［17］ ）．观察结果如下． 图2显示裸皮中存在着很集中的深蓝色物质 根据染色原理其为成纤维细胞成分周围紫红色的 纤维组织是胶原纤维．该图显示了胶原纤维结构稠 密并存在许多成纤维细胞． 图2 未经处理的裸皮平切HE 染色 Fig．2 Unprocessed naked skinflat cuttingHE dyeing 图3 处理后试样平切HE 染色 Fig．3 Processed sampleflat cuttingHE dyeing 图3和图4显示试样经处理后均保留了较完 ·194· 北 京 科 技 大 学 学 报 第29卷