液:重复若干次 G.悬浮微囊于含有吐温20的缓冲液中 ②界面聚合法 这是将亲水性单体和疏水性单体利用界面聚合的原理包埋酶的方法。例如,将含10%血红 蛋白的酶液与1,6-已二胺的水溶液混合,立即在含1%Span85的氯仿环己烷中分散乳化,加入 溶于有机相的癸二酰氯后,在油水界面上发生聚合反应,形成尼龙膜,将酶包埋。 除尼龙膜外,还有聚酰胺、聚脲等形成的微囊。此法制备的微囊大小能随乳化剂的浓度以 及乳化时的搅拌速度而自由控制,制备过程所需时间非常短。但在包埋时由于发生化学反应而容 易引起酶失活。 ③脂质体 脂质体是由磷脂类或其它脂类所组成的一种微粒。磷脂在水中搅拌以后能自动排列成双分 子层,或者多层次的双分子层,形成内部含水的球形颗粒。含酶的脂质体常用于治疗缺酶病。 制备脂质体的方法很简单。取40μmol卵磷脂、114μmol胆固醇、57μmo二乙酰磷酸, 用氯仿或其它有机溶剂配成2~3ml溶液,加到一干燥的50m圆底烧瓶中,在旋转蒸发器内37℃ 蒸去溶剂,溶质在瓶底形成一薄层。取下烧瓶立即加入1~2ml酶液及几粒玻璃小球,轻轻摇晃, 即得乳状脂质体的悬浮液,离心除去溶液,用缓冲液洗脂质体几次,最后将脂质体放在1%氯化 钠溶液中保存 924辅酶的固定: 有些酶需要辅酶才能催化反应,如一些脱氢酶和激酶分别需要NAD(P)和ATP。由于辅 酶价格昂贵,只有反复使用才有实用价值。通常是在主要酶反应中辅酶发生变化,而在一偶联的 再生反应中辅酶又恢复原状,从而达到反复使用的目的。若将辅酶固定到不溶性载体上就起不到 辅酶的作用,因为它不能在两个酶反应中来回运动。现在的方法是将辅酶固定到水溶性高分子化 合物上,然后和两种酶一起包埋到微囊中,这样辅酶可以在微囊中起作用,又不会从微囊中扩散 出来。这种方法要求两种酶反应的反应条件相似(如pH、温度等),若主反应和再生反应的反 应条件差别较大,则须分开进行 ATP的再生反应可以用乙酸激酶、氨基甲酸激酶、肌酸激酶等催化,如乙酸激酶催化的反 NAD的再生反应可以用乳酸脱氢酶,NADP的再生反应可以用葡萄糖脱氢酶 用于固定辅酶的水溶性高分子可用右旋糖酐、聚赖氨酸、聚乙亚胺等。9 液；重复若干次； G．悬浮微囊于含有吐温 20 的缓冲液中。 ② 界面聚合法： 这是将亲水性单体和疏水性单体利用界面聚合的原理包埋酶的方法。例如，将含 10％血红 蛋白的酶液与 1,6-己二胺的水溶液混合，立即在含 1％Span 85 的氯仿-环己烷中分散乳化，加入 溶于有机相的癸二酰氯后，在油水界面上发生聚合反应，形成尼龙膜，将酶包埋。 除尼龙膜外，还有聚酰胺、聚脲等形成的微囊。此法制备的微囊大小能随乳化剂的浓度以 及乳化时的搅拌速度而自由控制，制备过程所需时间非常短。但在包埋时由于发生化学反应而容 易引起酶失活。 ③ 脂质体： 脂质体是由磷脂类或其它脂类所组成的一种微粒。磷脂在水中搅拌以后能自动排列成双分 子层，或者多层次的双分子层，形成内部含水的球形颗粒。含酶的脂质体常用于治疗缺酶病。 制备脂质体的方法很简单。取 40μmol 卵磷脂、11.4μmol 胆固醇、5.7μmol 二乙酰磷酸， 用氯仿或其它有机溶剂配成 2～3ml 溶液，加到一干燥的 50ml 圆底烧瓶中，在旋转蒸发器内 37℃ 蒸去溶剂，溶质在瓶底形成一薄层。取下烧瓶立即加入 1～2ml 酶液及几粒玻璃小球，轻轻摇晃， 即得乳状脂质体的悬浮液，离心除去溶液，用缓冲液洗脂质体几次，最后将脂质体放在 1％氯化 钠溶液中保存。 9.2.4 辅酶的固定： 有些酶需要辅酶才能催化反应，如一些脱氢酶和激酶分别需要 NAD(P)＋和 ATP。 由于辅 酶价格昂贵，只有反复使用才有实用价值。通常是在主要酶反应中辅酶发生变化，而在一偶联的 再生反应中辅酶又恢复原状，从而达到反复使用的目的。若将辅酶固定到不溶性载体上就起不到 辅酶的作用，因为它不能在两个酶反应中来回运动。现在的方法是将辅酶固定到水溶性高分子化 合物上，然后和两种酶一起包埋到微囊中，这样辅酶可以在微囊中起作用，又不会从微囊中扩散 出来。这种方法要求两种酶反应的反应条件相似（如 pH、温度等），若主反应和再生反应的反 应条件差别较大，则须分开进行。 ATP 的再生反应可以用乙酸激酶、氨基甲酸激酶、肌酸激酶等催化，如乙酸激酶催化的反 应为： NAD 的再生反应可以用乳酸脱氢酶，NADP 的再生反应可以用葡萄糖脱氢酶。 用于固定辅酶的水溶性高分子可用右旋糖酐、聚赖氨酸、聚乙亚胺等