物理吸附法也能固定微生物细胞。 91.1.2离子结合: 这是通过离子键结合于具有离子交换基团的水不溶性载体的固定化方法。作为此法的载体 有各种离子交换纤维素,离子交换葡聚糖,离子交换树脂等。离子结合法的优缺点与物理吸附法 相似,但比物理吸附的结合力要强。当缓冲液的pH发生变化或离子强度较高时,酶易脱落。1969 年最早用于工业生产的固定化氨基酰化酶就是使用DEAE-葡聚糖凝胶固定的 91.1.3共价结合 这是酶以共价键结合于载体的固定化方法。可与载体结合的酶的功能团有α或ε-氨基,α、 β或γ-羧基,巯基,羟基,咪唑基,酚基等,但参与共价结合的氨基酸残基应当不是酶催化活 性所必需的,否则往往造成固定后酶活性完全丧失。共价结合的方法可分为两类,一类是先将载 体上的有关基团活化,然后与酶的有关基团偶联;另一类是用双功能分子连接载体和酶 用于共价结合的载体有葡聚糖、琼脂糖、纤维素、胶原、蚕丝、聚丙烯酰胺、聚丙烯腈、 尼龙、活性碳、硅藻土、多孔玻璃、不锈钢、磁性氧化铁、砂等 共价结合法与物理吸附法及离子交换法相比,反应条件较激烈,操作复杂,会引起酶构象 变化,酶活性丧失较多。酶活回收率一般在30%左右,有时甚至连底物的专一性也会发生变化 但酶与载体结合牢固,不易脱落:回收的酶活性稳定性较高。 91.2交联法: 这是用双功能或多功能试剂使酶与酶之间交联成立体化网状结构的固定化方法。此法与共 价结合法一样也是利用共价键固定酶的,所不同的是它不使用载体。作为交联剂的有形成希夫碱 的戊二醛,形成肽键的异氰酸酯,产生重氮偶合反应的双重氮联苯胺等。交联法反应条件比较激 烈,固定化的酶活回收率一般较低。尽可能地降低交联剂的浓度和缩短反应时间有利于固定化酶 比活性的提高。 氰酸(HOC≡N) 硫氰酸H-S-C≡N), 异氰酸(H-N=C=O) 异硫氰酸HN=C=S), 异氰酸酯(R-N=C=O) 异硫氰酸酯(R-N=C=S)。 9.1.3包埋法: 包埋法可分为网格型和微囊型两种。将酶或细胞包埋在高分子凝胶网格中的称为网格型, 将酶包埋在球状半透膜中的称为微囊型。包埋法一般不需要与酶形成共价键的反应,几乎不改变 酶的高级结构,酶活回收率高,因此可以用于许多酶、细胞、细胞器的固定化。但在发生化学聚 合反应时包埋,酶容易失活,必须小心设计反应条件。包埋法只适合于固定那些底物和产物均为 小分子的酶,对于那些作用于大分子的酶来说是不合适的,因为只有小分子底物和产物才能通过2 物理吸附法也能固定微生物细胞。 9.1.1.2 离子结合： 这是通过离子键结合于具有离子交换基团的水不溶性载体的固定化方法。作为此法的载体 有各种离子交换纤维素，离子交换葡聚糖，离子交换树脂等。离子结合法的优缺点与物理吸附法 相似，但比物理吸附的结合力要强。当缓冲液的 pH 发生变化或离子强度较高时，酶易脱落。1969 年最早用于工业生产的固定化氨基酰化酶就是使用 DEAE-葡聚糖凝胶固定的。 9.1.1.3 共价结合： 这是酶以共价键结合于载体的固定化方法。可与载体结合的酶的功能团有α或ε-氨基，α、 β或γ-羧基，巯基，羟基，咪唑基，酚基等，但参与共价结合的氨基酸残基应当不是酶催化活 性所必需的，否则往往造成固定后酶活性完全丧失。共价结合的方法可分为两类，一类是先将载 体上的有关基团活化，然后与酶的有关基团偶联；另一类是用双功能分子连接载体和酶。 用于共价结合的载体有葡聚糖、琼脂糖、纤维素、胶原、蚕丝、聚丙烯酰胺、聚丙烯腈、 尼龙、活性碳、硅藻土、多孔玻璃、不锈钢、磁性氧化铁、砂等。 共价结合法与物理吸附法及离子交换法相比，反应条件较激烈，操作复杂，会引起酶构象 变化，酶活性丧失较多。酶活回收率一般在 30％左右，有时甚至连底物的专一性也会发生变化。 但酶与载体结合牢固，不易脱落；回收的酶活性稳定性较高。 9.1.2 交联法： 这是用双功能或多功能试剂使酶与酶之间交联成立体化网状结构的固定化方法。此法与共 价结合法一样也是利用共价键固定酶的，所不同的是它不使用载体。作为交联剂的有形成希夫碱 的戊二醛，形成肽键的异氰酸酯，产生重氮偶合反应的双重氮联苯胺等。交联法反应条件比较激 烈，固定化的酶活回收率一般较低。尽可能地降低交联剂的浓度和缩短反应时间有利于固定化酶 比活性的提高。 氰酸 （H-O-C≡N）, 硫氰酸 （H-S-C≡N）, 异氰酸 （H-N=C=O）, 异硫氰酸 （H-N=C=S）, 异氰酸酯 （R-N=C=O）, 异硫氰酸酯 （R-N=C=S）。 9.1.3 包埋法： 包埋法可分为网格型和微囊型两种。将酶或细胞包埋在高分子凝胶网格中的称为网格型， 将酶包埋在球状半透膜中的称为微囊型。包埋法一般不需要与酶形成共价键的反应，几乎不改变 酶的高级结构，酶活回收率高，因此可以用于许多酶、细胞、细胞器的固定化。但在发生化学聚 合反应时包埋，酶容易失活，必须小心设计反应条件。包埋法只适合于固定那些底物和产物均为 小分子的酶，对于那些作用于大分子的酶来说是不合适的，因为只有小分子底物和产物才能通过