高分子凝胶的网格及半透膜扩散,而大分子底物无法与网格中或微囊中的酶或细胞接触。 91.3.1网格型 形成网格有两种方法,一种方法是把酶或细胞与能形成高分子聚合物的单体混合,然后使 单体聚合成网格状凝胶,如聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、光敏树脂等,酶或细胞就被包埋在网格中。 另一种方法是将溶胶状的天然高分子物质与酶或细胞混合,然后凝胶化,如淀粉、琼脂、明胶 胶原、海藻酸、角叉菜胶等 网格型包埋是固定细胞用得最多且最有效的方法。 91.3.2微囊型 微囊通常是直径几微米到几百微米的球状体,内有含酶的溶液,微囊的膜可让小分子物质 通过,但酶不能通过。小分子底物通过扩散进入囊内,经酶反应生成产物后再扩散出来。作为膜 材料的有硝酸纤维素(用乙醇和乙醚混合液溶解则为火棉胶)、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯 尼龙、聚酰胺、聚脲等 脂质体:用表面活性剂和卵磷脂制成的液膜微囊 微囊型颗粒比网格型颗粒要小得多,有利于底物和产物的扩散,但微囊制备时反应条件要 求高,制备成本也高。 92固定化技术 921载体固定法 92.1.1物理吸附: 由物理吸附法将酶固定到载体上有三种方法:a.混合浴或振荡浴吸附法;b.反应器中直接 吸附法:c.电淀积法。在三种技术中,实验室制备固定化酶最常采用的技术是混合浴或振荡浴 吸附法。它是将载体加到酶液中搅拌混合或于水浴中连续振荡,使酶均匀吸附到载体上。工业上 最好采用在反应器中直接吸附的方法,先将要使用的载体装入反应器中,然后将酶加入,并进行 搅动或循环通过反应器。电淀积法是将载体放在酶液中靠近一个电极处,加上电场,酶移向载体, 并沉积在载体表面 吸附效果与许多因素有关,如pH、溶剂性质、离子强度、时间、温度、酶量及吸附剂的量 等。由于蛋白质和吸附剂之间的结合力(主要是氢键、范德华力和疏水作用等)比较弱,需严格 控制这些条件。影响酶吸附到载体上的量的主要因素,是在固定化过程中与单位面积载体接触的 酶浓度,固定化酶活性随酶浓度增加而增加,在较高酶浓度下逐渐接近于饱和值。用吸附法制备 固定化酶时,温度和时间是重要参数,特别是用多孔载体时,这两个参数更加重要,因为把酶固 定到这样的载体上时,扩散是重要因素。 使用物理吸附法固定的酶时,要注意采用酶不易脱落的条件。3 高分子凝胶的网格及半透膜扩散，而大分子底物无法与网格中或微囊中的酶或细胞接触。 9.1.3.1 网格型： 形成网格有两种方法，一种方法是把酶或细胞与能形成高分子聚合物的单体混合，然后使 单体聚合成网格状凝胶，如聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、光敏树脂等，酶或细胞就被包埋在网格中。 另一种方法是将溶胶状的天然高分子物质与酶或细胞混合，然后凝胶化，如淀粉、琼脂、明胶、 胶原、海藻酸、角叉菜胶等。 网格型包埋是固定细胞用得最多且最有效的方法。 9.1.3.2 微囊型： 微囊通常是直径几微米到几百微米的球状体，内有含酶的溶液，微囊的膜可让小分子物质 通过，但酶不能通过。小分子底物通过扩散进入囊内，经酶反应生成产物后再扩散出来。作为膜 材料的有硝酸纤维素（用乙醇和乙醚混合液溶解则为火棉胶）、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、 尼龙、聚酰胺、聚脲等。 脂质体：用表面活性剂和卵磷脂制成的液膜微囊。 微囊型颗粒比网格型颗粒要小得多，有利于底物和产物的扩散，但微囊制备时反应条件要 求高，制备成本也高。 9.2 固定化技术： 9.2.1 载体固定法： 9.2.1.1 物理吸附： 由物理吸附法将酶固定到载体上有三种方法：a. 混合浴或振荡浴吸附法；b.反应器中直接 吸附法；c. 电淀积法。在三种技术中，实验室制备固定化酶最常采用的技术是混合浴或振荡浴 吸附法。它是将载体加到酶液中搅拌混合或于水浴中连续振荡，使酶均匀吸附到载体上。工业上 最好采用在反应器中直接吸附的方法，先将要使用的载体装入反应器中，然后将酶加入，并进行 搅动或循环通过反应器。电淀积法是将载体放在酶液中靠近一个电极处，加上电场，酶移向载体， 并沉积在载体表面。 吸附效果与许多因素有关，如 pH、溶剂性质、离子强度、时间、温度、酶量及吸附剂的量 等。由于蛋白质和吸附剂之间的结合力（主要是氢键、范德华力和疏水作用等）比较弱，需严格 控制这些条件。影响酶吸附到载体上的量的主要因素，是在固定化过程中与单位面积载体接触的 酶浓度，固定化酶活性随酶浓度增加而增加，在较高酶浓度下逐渐接近于饱和值。用吸附法制备 固定化酶时，温度和时间是重要参数，特别是用多孔载体时，这两个参数更加重要，因为把酶固 定到这样的载体上时，扩散是重要因素。 使用物理吸附法固定的酶时，要注意采用酶不易脱落的条件