921.2离子结合: 离子结合的方法与物理吸附法相似,现举一个将氨基酰化酶结合到 DEAE-Sephadex上的例 子 将充分溶胀的 DEAE-Sephadex A-25用0.05 N Naoh和水洗后,与预先调pH至70~75的 氨基酰化酶酶液(酶活约25 H mol/h/m混合,离子交换剂与酶液的比例为1g湿重的 DEAE- Sephadex A-25加6om酶液。混合物在低温下搅拌过夜,然后除去上清液,依次用水和 0.5mo几L醋酸钠溶液洗涤,就得到固定化酶。酶活性回收一般可达50%左右,可连续使用一个 月左右 921.3共价结合: 共价结合的许多反应与酶的化学修饰的反应相同。 ①重氮化 yr-E HAr-NH2-209>HAr-N=N Ax-N=N-Tyr-酶 芳香重氮基与酶分子上的酚基或咪唑基反应。酶分子中的自由氨基也可参加反应,生成长ym 我国开发出了一种较好的固定化方法,它是在碱性条件下,用β-硫酸酯乙砜基苯 胺(SESA)与纤维素(或其它多糖)载体上的羟基反应,生成对氨基苯磺酰乙基纤维素,再重 氮化,然后与酶偶联。 OH++ HO-S-0-CHe-CH m-→30cm=cm man3-0-cH-cHa-io-i-N+(s-o cH2-CH2“>MB ②形成酰胺键 a.酸酐衍生物:通常是用顺丁烯二酸酐共聚的酸酐衍生物与酶的氨基反应,形成酰胺键,同 时产生的羧基可用加二胺化合物来封闭 +H2N-( b.酰基叠氮衍生物:用含羧基或羟基(羟基先转换成羧基)的载体,加醇成酯,再加肼成酰 肼,再加亚硝酸成酰基叠氮,再与酶分子的氨基反应,生成酰胺 ClCH2COOH ÷o-cH2CoOH CH3 OH COOCHa- NH2> Ho-CH2-Co-HN-NH2 NaNo2 O-CH2-CO-N3 o-cH2-co-H(的 c.亚氨碳酸衍生物:溴化氰活化法。 d.异氰酸和异硫氰酸衍生物:在碱性条件下,带有芳香氨基的载体可用光气或硫化光气加以4 9.2.1.2 离子结合： 离子结合的方法与物理吸附法相似，现举一个将氨基酰化酶结合到 DEAE-Sephadex 上的例 子。 将充分溶胀的 DEAE-Sephadex A-25 用 0.05N NaOH 和水洗后，与预先调 pH 至 7.0～7.5 的 氨基酰化酶酶液( 酶活约 25μmol/h/ml) 混合， 离子交换剂与酶液的比例为 1g 湿重的 DEAE-Sephadex A-25 加 60ml 酶液。 混合物在低温下搅拌过夜， 然后除去上清液，依次用水和 0.15mol/L 醋酸钠溶液洗涤，就得到固定化酶。酶活性回收一般可达 50％左右，可连续使用一个 月左右。 9.2.1.3 共价结合： 共价结合的许多反应与酶的化学修饰的反应相同。 ① 重氮化： 芳香重氮基与酶分子上的酚基或咪唑基反应。酶分子中的自由氨基也可参加反应，生成 我国开发出了一种较好的固定化方法，它是在碱性条件下，用β-硫酸酯乙砜基苯 胺（SESA）与纤维素（或其它多糖）载体上的羟基反应，生成对氨基苯磺酰乙基纤维素，再重 氮化，然后与酶偶联。 ② 形成酰胺键： a. 酸酐衍生物：通常是用顺丁烯二酸酐共聚的酸酐衍生物与酶的氨基反应，形成酰胺键，同 时产生的羧基可用加二胺化合物来封闭。 b. 酰基叠氮衍生物：用含羧基或羟基（羟基先转换成羧基）的载体，加醇成酯，再加肼成酰 肼，再加亚硝酸成酰基叠氮，再与酶分子的氨基反应，生成酰胺。 c. 亚氨碳酸衍生物：溴化氰活化法。 d. 异氰酸和异硫氰酸衍生物：在碱性条件下，带有芳香氨基的载体可用光气或硫化光气加以