原理 基于2'、3'ddNTP在脱氧核糖的3'位置缺少羟基，当 DNA聚合酶通过其5'三磷酸基团掺入到正在增长的DNA 链后，因其缺乏3羟基，后继的dTP不能与之形成磷酸 二酯键，从而使DNA链终止延伸。于是，在DNA合成反 应混合物的4种dNTP中加入少量的一种ddNTP,当DNA 合成过程中，随机掺入到正在增长的DNA链上的ddNTP 将终止链的进一步延伸，这样，以同一DNA为模版所合成 的拷贝链，将是一系列不同长度的核苷酸链，其长度取决 于引物末端到过早出现链终止位置之间的距离。在四组独 立的反应体系中，分别加入4种不同的ddNTP和一种经标 记的dNTP,结果将产生4组长度不均的寡核苷酸，分别终 止于模板链的每一个A、C、G或T的位置上。然后采用能 分辩长度仅差一个核苷酸的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，把 四组反应液加样于凝胶中若干相邻的泳道上，电泳并放射 自显影后，从凝胶的放射自显影片上可直接读出DNA上的 核苷酸序列