实验六细胞骨架的显示与观察 一、目的和要求 掌握细胞骨架的光镜临时装片标本的制作方法。 二、实验原理 细胞骨架是指细胞中纵横交错的纤维网络结构，它们是由各种不同成分 的蛋白质组成，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维， 它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重 要作用。 在光镜下观察细胞骨架，通常用非离子去垢剂triton X-l00处理使细 胞膜和胞内的脂类物质被溶解，再用固定剂对细胞骨架进行固定，然后用非 特异性蛋白染料对其进行染色，使胞质中的细胞骨架得以清晰显现。 三、材料和用品 6mM磷酸缓冲液PBS、1%tritonX-100(去垢剂)、3%戊二醛、0.2%考 马斯亮兰R250染料、洋葱。 光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、培养皿、吸水纸、吸管、水浴锅。 四、实验内容与方法 细胞器是构成细胞的基本结构和功能单位。在光镜下，我们只能观察到 线粒体、高尔基体、中心体和细胞核等细胞器的形态。通过特殊处理和染色， 我们也能够看到细胞骨架的基本形态。 实验步骤： 1.取材：撕取洋葱鳞茎内表皮2-3mm2置于载玻片上，用吸管加6mMol PBS缓冲液两滴，使材料充分浸入到液体中，处理5.10分钟。 2.去垢处理：用吸水纸吸净浸泡材料的PBS,加2-3滴去垢剂1%Triton X-100,使液体充分浸泡材料，并立即放入37℃水浴锅中处理15分钟。 3.冲洗：吸去1%Triton,用6 nMol PBS缓冲液轻轻冲洗两次，每次5 分钟 4.固定：用吸管将PBS缓冲液吸尽，加2滴3%戊二醛固定20分钟 5.冲洗：吸去3%戊二醛固定液，用6 nMol PBS缓冲液冲洗两次，每次 5分钟。 6.染色：吸去PBS缓冲液，滴几滴0.2%考马斯亮兰R250染料，染色 15 实验六 细胞骨架的显示与观察 一、目的和要求 掌握细胞骨架的光镜临时装片标本的制作方法。 二、实验原理 细胞骨架是指细胞中纵横交错的纤维网络结构，它们是由各种不同成分 的蛋白质组成，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。 它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重 要作用。 在光镜下观察细胞骨架，通常用非离子去垢剂 triton X-100 处理使细 胞膜和胞内的脂类物质被溶解，再用固定剂对细胞骨架进行固定，然后用非 特异性蛋白染料对其进行染色，使胞质中的细胞骨架得以清晰显现。 三、材料和用品 6mM 磷酸缓冲液 PBS、1% triton X-100（去垢剂）、3%戊二醛、0.2%考 马斯亮兰 R250 染料、洋葱。 光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、培养皿、吸水纸、吸管、水浴锅。 四、实验内容与方法 细胞器是构成细胞的基本结构和功能单位。在光镜下，我们只能观察到 线粒体、高尔基体、中心体和细胞核等细胞器的形态。通过特殊处理和染色， 我们也能够看到细胞骨架的基本形态。 实验步骤： 1.取材：撕取洋葱鳞茎内表皮 2-3mm2 置于载玻片上，用吸管加 6 mMol PBS 缓冲液两滴，使材料充分浸入到液体中，处理 5-10 分钟。 2.去垢处理：用吸水纸吸净浸泡材料的 PBS，加 2-3 滴去垢剂 1%Triton X-100，使液体充分浸泡材料，并立即放入 37℃水浴锅中处理 15 分钟。 3.冲洗：吸去 1%Triton，用 6mMol PBS 缓冲液轻轻冲洗两次，每次 5 分钟。 4.固定：用吸管将 PBS 缓冲液吸尽，加 2 滴 3%戊二醛固定 20 分钟。 5.冲洗：吸去 3%戊二醛固定液，用 6mMol PBS 缓冲液冲洗两次，每次 5 分钟。 6.染色：吸去 PBS 缓冲液，滴几滴 0.2%考马斯亮兰 R250 染料，染色