()原生质体转化法:除去细胞壁后加外源DNA,经 吸收恢复再生培养,如枯草杆菌。 (化学转化法:1970年 Mandel和Hga首先用CaCl2 经短暂的热休克后,可使外源DNA转入 E coli 1.原理:将对数生长期的细菌在0℃下,用预冷的 CaCL溶液低渗处理,以使菌体的细胞壁和细胞膜 通透性增加,菌体膨胀成球形。DNA易于进入细 菌的细胞内。 用冷CaC2低渗处理Ecoi使菌体成球形, 外源DNA可形成抗 DNase的羟基-钙磷酸复合物而 被吸附,经短暂42℃热休克,易于进入胞内而不 被降解,转化效率达105-106,它与菌株(hsdR) 2方法 1)感受态细菌的制备(2)转化㈠ 原生质体转化法:除去细胞壁后加外源DNA，经 吸收恢复再生培养，如枯草杆菌。 ㈡ 化学转化法: 1970年Mandel和Higa首先用CaCl2 经短暂的热休克后，可使外源DNA转入E.coli。 1.原理：将对数生长期的细菌在0℃下, 用预冷的 CaCl2溶液低渗处理, 以使菌体的细胞壁和细胞膜 通透性增加, 菌体膨胀成球形。DNA易于进入细 菌的细胞内 。 用冷CaCl2低渗处理E.coli使菌体成球形， 外源DNA可形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物而 被吸附，经短暂42℃热休克，易于进入胞内而不 被降解，转化效率达105 -106，它与菌株（hsdR- ). 2.方法 : （1）感受态细菌的制备 （2）转化