(1)感受态细菌的制备 接种一环DH5a于2mlLB中37℃,振荡过夜 以约1%的接种量接入20mLB中 振荡培养约90至OD600.2离心(K,5) 收集菌体—一加入预冷CaC12(10ml100mM) 冰浴20 离心收集菌体 加入 100u00mM预冷CaCl2混匀（1）感受态细菌的制备 接种一环DH5于2ml LB中 37℃，振荡过夜 以约1%的接种量接入20ml LB中 振荡培养约90’至OD600≈0.2 离心（5K，5’） 收集菌体 加入预冷CaCl2（10 ml 100mM） 冰浴20’ 离心 收集菌体 加入 100ul100mM预冷CaCl2混匀