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实验二沉淀试验 可溶性抗原(如细菌浸出液、含菌病料浸出液、病毒、血清以及其他来源的蛋白质、多 糖、类脂等)与其相应的抗体结合后,在电解质参与下,形成肉眼可见的白色沉淀,称为沉 淀反应(Precipitation reaction)。沉淀反应中的抗原称为沉淀原(Precipitinogen),抗体称为 沉淀素(Precipitin)。 沉淀反应主要包括有环状沉淀试验、琼脂扩散沉淀试验及免疫电泳等。 目的要求] 1.掌握炭疽环状沉淀试验的操作方法和结果观察。 2.掌握琼脂扩散沉淀试验的原理和操作方法。 3.了解对流免疫电泳的一般原理和操作技术。 材料与试剂] 1.口径0.4cm的小试管,毛细滴管,载玻片,平皿,烧杯没,打孔器,针头,酒精灯, 加样器(移液器),滴头,电泳槽,电泳仪等。 2.生理盐水,8.5%NaC1溶液,0.5%石炭酸生理盐水,巴比妥缓冲液,琼脂粉等。 3.炭疽沉淀抗原(炭疽标准抗原),炭疽沉淀素血清,待检抗原。 4.禽流感琼扩抗原,贪流感阳性血清,待检鸡血消:兔抗猪【gG,猪血清,鸡血清,兔 血清、牛血清,羊血清等。 5.小鹅瘟琼扩抗原,小鹅瘟抗血清:鸡传染性法氏囊病琼扩抗原(或待检法氏囊组织 浸提液),鸡传染性法氏囊病阳性血清。 [实验内容及操作方法] (一)环状沉淀试验 环状沉淀试验(Ring precipitation test)是最早的沉淀反应。目前在链球菌的分类、鉴定, 昆虫吸血性能及所吸血液来自何种动物的鉴别,肉品种属鉴定及炭疽尸体与皮张的检验工作 中仍然应用。以炭疽环状沉淀反应为例,此反应又称Asoi氏反应。 1.待检抗原的制备 (1)取疑为炭疽死亡动物的实质脏器1g放入小烧杯中剪碎,加生理盐水5-101,煮沸 30min,冷却后用滤纸过滤使之呈清澈透明的液体,即为待检抗原。 6
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