行亲和力成熟。 三、学习重点和难点 重点：噬菌体抗体库制备及筛选的基本技术 难点：理解大容量抗体库的概念。 四、教学方法 自主学习3学时+课堂讲授3学时。 第七章转人-g基因小鼠 一、目的和要求 掌握转人-Ig基因小鼠的概念、原理：熟悉制备转人Ig基因小鼠的主要步骤：了解 转人Ig基因小鼠的构建过程。 二、主要内容 1.概术 转基因小鼠的概念：除了固有的基因组外，小鼠体内还有一个或以上外来转入基因， 它能表达和体现转入基因的功能，实现特定目的。 转人-Ig基因小鼠制备主要步骤：获得人免疫球蛋白基因（重链IgH和轻链Igk): 小鼠ES细胞的培养：小鼠内源性免疫球蛋白基因重链Ig和轻链Igk的敲除灭活：获 得含完整人Ig-VACs克隆：Ig-VACs克隆向ES细胞的导入：含人Ig-VACs的ES细胞移 入小鼠胚胎：含人Ig-YACs-ES细胞的小鼠胚胎向小鼠体内的送还和嵌合，纯合小鼠的 产生及鉴定：通过纯合小鼠制备特异性完全人源化抗体。 2.人工染色体技术 了解人工染色体载体的特点和含人免疫球蛋白-人工染色体文库的构建及筛选过 程。 3.小鼠环胎干细胞 了解小鼠胚胎干细胞分离培养的基本步骤及其应用。 4.基因敲除技术 了解基因敲除技术和小鼠内源性免疫球蛋白基因的敲除。 5.含人免疫球蛋白转基因小鼠的构建 构建过程包括：含人免疫球蛋白一酵母人工染色体克隆向小鼠胚胎干细胞的导入 (Ig-YACs-ES细胞的形成)：小鼠胚胎的制备和Ig-YAC-ES细胞向小鼠胚胎的植入：含 人Ig-YC-ES细胞的小鼠胚胎送还小鼠体内和产生含人免疫球蛋白基因的嵌合小鼠：含 人免疫球蛋白纯合小鼠的制备：从含人免疫球蛋白纯合小鼠制备特异的完全人源化抗 体。 6.转基因小鼠的种系的建立 三、学习重点和难点 重点：转人-g基因小鼠的概念、原理。行亲和力成熟。 三、学习重点和难点 重点：噬菌体抗体库制备及筛选的基本技术。 难点：理解大容量抗体库的概念。 四、教学方法 自主学习 3 学时+课堂讲授 3 学时。 第七章 转人-Ig 基因小鼠 一、目的和要求 掌握转人-Ig 基因小鼠的概念、原理；熟悉制备转人 Ig 基因小鼠的主要步骤；了解 转人 Ig 基因小鼠的构建过程。 二、主要内容 ⒈ 概述 转基因小鼠的概念：除了固有的基因组外，小鼠体内还有一个或以上外来转入基因， 它能表达和体现转入基因的功能，实现特定目的。 转人-Ig 基因小鼠制备主要步骤：获得人免疫球蛋白基因（重链 IgH 和轻链 Igk）； 小鼠 ES 细胞的培养；小鼠内源性免疫球蛋白基因重链 IgH 和轻链 Igk 的敲除灭活；获 得含完整人 Ig-VACs 克隆；Ig-VACs 克隆向 ES 细胞的导入；含人 Ig-VACs 的 ES 细胞移 入小鼠胚胎；含人 Ig-YACs-ES 细胞的小鼠胚胎向小鼠体内的送还和嵌合，纯合小鼠的 产生及鉴定；通过纯合小鼠制备特异性完全人源化抗体。 ⒉ 人工染色体技术 了解人工染色体载体的特点和含人免疫球蛋白-人工染色体文库的构建及筛选过 程。 ⒊ 小鼠胚胎干细胞 了解小鼠胚胎干细胞分离培养的基本步骤及其应用。 ⒋ 基因敲除技术 了解基因敲除技术和小鼠内源性免疫球蛋白基因的敲除。 ⒌ 含人免疫球蛋白转基因小鼠的构建 构建过程包括：含人免疫球蛋白－酵母人工染色体克隆向小鼠胚胎干细胞的导入 （Ig-YACs-ES 细胞的形成）；小鼠胚胎的制备和 Ig-YAC-ES 细胞向小鼠胚胎的植入；含 人 Ig-YAC-ES 细胞的小鼠胚胎送还小鼠体内和产生含人免疫球蛋白基因的嵌合小鼠；含 人免疫球蛋白纯合小鼠的制备；从含人免疫球蛋白纯合小鼠制备特异的完全人源化抗 体。 ⒍ 转基因小鼠的种系的建立 三、学习重点和难点 重点：转人-Ig 基因小鼠的概念、原理