2.杆形:大肠杆菌Gˉ——菌体短杆状,染成红色,呈不规则分散排列。G杆菌 3.螺形:霍乱弧菌Gˉ—一菌体弧形,染成红色,呈不规则分散排列。G弧菌。 革兰染色法(操作) 细菌革兰染色有助于鉴别细菌 【原理】 细菌的等电点较低,约在pH2~5之间,故在中性、碱性或弱碱性溶液中,菌体蛋白质电 离后带负电荷,易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合,使细菌被染成紫色或 红色。革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法,籍此染色法,可将所有细菌区分为 两大类。 【材料】 1.葡萄球菌、大肠杄菌18~24小时普通琼脂斜面培养物。 2.革兰染色液。 3.生理盐水,载物玻片,接种环等。 【方法】 1.制片: )灭菌:接种环以15°角置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌(图1-3),直至金属丝烧红,然 后将金属柄部也回旋通过火焰烧灼灭菌,重复三次 2)涂片 ①取清洁无油污载物玻片一张,已灭菌接种环沾取生理盐水1-2环置于玻片中央。 ②用右手小指和手掌小鱼肌侧拔下左手所持菌种的试管盖,并立即火焰烧灼试管口灭 ③再用已灭菌冷却接种环伸入试管中,沾取少许葡萄球菌或大肠杄菌菌苔,混于生理盐 水中,轻轻涂成均匀薄膜。 ④再次灭菌试管口,盖好试管,放回原处。 ⑤然后将接种环用火焰烧灼灭菌。为防止细菌溅散污染环境,接种环灭菌前,须先将接 种环靠近火焰或放内焰中烤干,然后再在外焰中娆红灭菌,杀死残留的细菌。(若菌种为脓 液、痰液等液体标本,注意取菌液时(图1-4)勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及试管口 3)干燥:最好在室温自然干燥,如需加速干燥,也可将涂面向上,远离火焰上方微加温 干燥(离火焰20cm处,切勿加热过度,以防将标本烧枯) 4)固定:标本干燥后,用加热固定法固定。常玻片有菌膜的面向上,在火焰的最热部 分通过酒精灯火焰三次(约2~3秒钟),固定的目的是杀死细菌使之固定于玻片上,并使细 菌蛋白变性,以改变菌体对染料的通透性 2.染色:根据不同的染色要求使用相应染色液进行染色。 ①初染:于涂抹面上滴加结晶紫染液1~2滴,覆盖涂面,室温染色一分钟。用细流水冲 洗剩留染液,甩去片上积水 ②媒染:滴加卢戈碘液,室温作用一分钟,细流水冲洗,甩去积水 ③脱色:将载玻片浸于95%酒精缸中,上下提取,边提边看,直至涂面流下的液体无 色为止(约30秒钟)。细流水冲洗,甩去积水5 2. 杆形：大肠杆菌G －——菌体短杆状，染成红色，呈不规则分散排列。G-杆菌。 3. 螺形：霍乱弧菌G －——菌体弧形，染成红色，呈不规则分散排列。G-弧菌。 三、革兰染色法（操作） 细菌革兰染色有助于鉴别细菌。 【原理】 细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电 离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或 红色。革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法，籍此染色法，可将所有细菌区分为 两大类。 【材料】 1. 葡萄球菌、大肠杆菌18~24小时普通琼脂斜面培养物。 2. 革兰染色液。 3. 生理盐水，载物玻片，接种环等。 【方法】 1．制片： 1）灭菌：接种环以 15°角置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌(图 1-3)，直至金属丝烧红，然 后将金属柄部也回旋通过火焰烧灼灭菌，重复三次。 2） 涂片： ①取清洁无油污载物玻片一张，已灭菌接种环沾取生理盐水 1~2 环置于玻片中央。 ②用右手小指和手掌小鱼肌侧拔下左手所持菌种的试管盖，并立即火焰烧灼试管口灭 菌。 ③再用已灭菌冷却接种环伸入试管中，沾取少许葡萄球菌或大肠杆菌菌苔，混于生理盐 水中，轻轻涂成均匀薄膜。 ④再次灭菌试管口，盖好试管，放回原处。 ⑤然后将接种环用火焰烧灼灭菌。为防止细菌溅散污染环境，接种环灭菌前，须先将接 种环靠近火焰或放内焰中烤干，然后再在外焰中烧红灭菌，杀死残留的细菌。（若菌种为脓 液、痰液等液体标本，注意取菌液时(图 1-4)勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及试管口。 3）干燥：最好在室温自然干燥，如需加速干燥，也可将涂面向上，远离火焰上方微加温 干燥（离火焰20㎝处，切勿加热过度，以防将标本烧枯）。 4）固定：标本干燥后，用加热固定法固定。常玻片有菌膜的面向上，在火焰的最热部 分通过酒精灯火焰三次（约 2~3 秒钟），固定的目的是杀死细菌使之固定于玻片上，并使细 菌蛋白变性，以改变菌体对染料的通透性。 2. 染色：根据不同的染色要求使用相应染色液进行染色。 ①初染：于涂抹面上滴加结晶紫染液1～2滴，覆盖涂面，室温染色一分钟。用细流水冲 洗剩留染液，甩去片上积水。 ②媒染：滴加卢戈碘液，室温作用一分钟，细流水冲洗，甩去积水。 ③脱色：将载玻片浸于 95%酒精缸中，上下提取，边提边看，直至涂面流下的液体无 色为止（约 30 秒钟）。细流水冲洗，甩去积水