二、基本步骤 1. 限制酶消化待测DNA,得到长度为100-200bp的一组片段，纯化 回收每1个片段作为测序材料。 2. 碱性磷酸酶处理消除5'磷酸。 3. 多核苷酸酶催32 PdNTP:标记(5'-OH)末端。 4. 使标记片段变性为单链。 5. 分成4个反应体系，进行化学处理，严格控制反应条件。（使得平 均每1个DNA分子只有1个位置被断裂，这种断裂是随机的，如G 反应，则在DNA链上任意位置G断裂。这样，每个反应中虽然都 在同一核苷酸处断裂DNA链，但由于碱基位置不同，产生组不同 长度的DNA片段。其长度可由几个核苷酸到接近待测DNA全长。 6. 电泳 7. 放射自显影 8. 4个反应管统一阅读，DNA4个碱基每个位置都有一个相应的片段， 待测DNA全部核苷酸序列就可直接读出。 5/92 5/92 二、基本步骤 1. 限制酶消化待测DNA，得到长度为100-200bp的一组片段，纯化 回收每1个片段作为测序材料。 2. 碱性磷酸酶处理消除5’磷酸。 3. 多核苷酸酶催32PdNTP标记（5’-OH）末端。 4. 使标记片段变性为单链。 5. 分成4个反应体系，进行化学处理，严格控制反应条件。（使得平 均每1个DNA分子只有1个位置被断裂，这种断裂是随机的，如G 反应，则在DNA链上任意位置G断裂。这样，每个反应中虽然都 在同一核苷酸处断裂DNA链，但由于碱基位置不同，产生1组不同 长度的DNA片段。其长度可由几个核苷酸到接近待测DNA全长。 6. 电泳 7. 放射自显影 8. 4个反应管统一阅读，DNA4个碱基每个位置都有一个相应的片段， 待测DNA全部核苷酸序列就可直接读出