不能与免疫系统接触而透发免疫反应，从而此阶段没有HBAb的产生。只有当 HRV DNA成垫、复制后表达出HRcAg流离于咸达细胞中时，它才制将鱼疼系统活 发免疫反应（细胞免疫，体液免疫），即Bc仙出现 其中，HBcIgG是非保 抗体，BcIM的存在提示BV处于复制状态：同时诱发的细胞反应对BV的清 除起重要作用。故常仅检测HBcAb或HBcIgM。 三、乙型肝炎病毒“二对半”的检测方法 35min 应用免疫学ESA方法进行检测，其中重要与关键的酶标复合物 1、HBsAg、BeAg、HBsAb的检测用双Ab或Ag夹心ELISA法：包被McAb或A -待检样品 一Ab-或Ag-RP,若样品中存在待检Ag或Ab,则形成McA北 或Ag-Ag或Ab-Ab-或Ag-HRP复合物，加入TMB后显色，显色程度与Ag或 Ab的量呈正比：若无Ag或Ab,则不显色。 而BsAg的检测用双位点一步夹心法：包被McHBsAb一一待检血清 -McHRsAh* -HRP,若样品中存在HBsAg,形成McHBsAb-HBsAg-McHBsAb-HRP复合物，加 入TMB后显色，显色程度与HBsAg的量呈正比：若无HBsAg,则不显色。 检测指标包被 被测 酶结合物 ①.HBsAg HBsAb +HBsAb-HRD显色(+) ②.BsA HBsAb HBsAg-HRP 显色(+) ③.HbeAg HBeAb +HBeAg+BeAb-RP显色(+) 2、BeAb的检测用中和抑制ELISA法：包被McHBeAb-一 一待检血洁-Hreag-HBeA -RP,若样品中存在BeAb,则形成的BeAg-BeAb和BeAg-BeAb-HRP同时上 包被的McHEeAb竞争结合，但据形成的HEeAg-BeAb和HBeAg-Beb-RP复 物方程的平衡常数得知HBeAg-McHBeAb-RP的量与样品BeAb的量呈反比，故 加入TB后显色程度与B出的量呈反比：若样品中无HBcAb,则显色达最深。 检测指标 包被 被测 酶结合物 ④.HReAb HBeAg+ HBeAb + IBeAb-HR即显色(-) 3、Bcb的检测用竞争抑制ELISA法：包被BcAg—一待检血清-McHBcAb-RP 若样品中存在BcAb,则据形成的BcAg-BcAb和IBcAg-McHBcAb -HRP复合物方程的平衡常数得知HBcAg-McHBcAb-HRP的量与样 品HBcAb的量呈反比，故加入TB后显色程度与Bcb的量呈反 比：若样品中无Bcb,则显色达最深。 检测指标 包被 被测 酶结合物 ⑤.HBcAb HBcAg+HBcAb+HBcAb-HRP显色(-) 四、试验操作一一严格按试剂盒说明书进行 70min 1、从冷藏箱中取出试剂盒反应板每种四个孔，在室温下平衡30min,标记“+ ,样品 空白”，同时将浓缩洗 液作1：20稀释： 2、加待测样品50ul,对照试剂各1滴(50ul): 3、加酶结合物，每孔加入相应的酶复合物1滴，充分混匀后置37℃30min: 4、洗板，弃去反应液，拍干：用稀释洗涤液注满每孔后静置10~15s,弃去拍 不能与免疫系统接触而诱发免疫反应，从而此阶段没有 HBcAb 的产生。只有当 HBV DNA 感染、复制后表达出 HBcAg 游离于感染细胞中时，它才刺激免疫系统诱 发免疫反应（细胞免疫，体液免疫），即 HBcAb 出现；其中，HBcIgG 是非保护性 抗体，HBcIgM 的存在提示 HBV 处于复制状态；同时诱发的细胞反应对 HBV 的清 除起重要作用。故常仅检测 HBcAb 或 HBcIgM。 三、乙型肝炎病毒“二对半”的检测方法 应用免疫学 ELISA 方法进行检测，其中重要与关键的酶标复合物。 1、HBsAg、HBeAg、HBsAb 的检测用双 Ab 或 Ag 夹心 ELISA 法：包被 McAb 或 Ag ——待检样品——Ab­或 Ag­HRP，若样品中存在待检 Ag 或 Ab，则形成 McAb 或 Ag-Ag­或 Ab-Ab­或 Ag­HRP 复合物，加入 TMB 后显色，显色程度与 Ag 或 Ab 的量呈正比；若无 Ag 或 Ab，则不显色。 而HBsAg的检测用双位点一步夹心法：包被McHBsAb1——待检血清——McHBsAb2 ­HRP，若样品中存在 HBsAg，形成 McHBsAb1 -HBsAg-McHBsAb2 ­HRP 复合物，加 入 TMB 后显色，显色程度与 HBsAg 的量呈正比；若无 HBsAg，则不显色。 检测指标 包被 被测 酶结合物 ①.HBsAg HBsAb + HBsAg + HBsAb-HRP 显色（+） ②.HBsAb HBsAg + HBsAb + HBsAg-HRP 显色（+） ③.HbeAg HBeAb + HBeAg + HBeAb-HRP 显色（+） 2、HBeAb 的检测用中和抑制 ELISA 法：包被 McHBeAb——待检血清-HBeAg-HBeAb ­HRP，若样品中存在 HBeAb，则形成的 HBeAg-HBeAb 和 HBeAg-HBeAb­HRP 同时与 包被的 McHBeAb 竞争结合，但据形成的 HBeAg-HBeAb 和 HBeAg-HBeAb­HRP 复合 物方程的平衡常数得知 HBeAg-McHBeAb­HRP 的量与样品 HBeAb 的量呈反比，故 加入 TMB 后显色程度与 HBeAb 的量呈反比；若样品中无 HBcAb，则显色达最深。 检测指标 包被 被测 酶结合物 ④．HBeAb HBeAg + HBeAb + HBeAb-HRP 显色（-） 3、HBcAb 的检测用竞争抑制 ELISA 法：包被 HBcAg——待检血清-McHBcAb­HRP， 若样品中存在HBcAb，则据形成的HBcAg-HBcAb和HBcAg-McHBcAb ­HRP 复合物方程的平衡常数得知 HBcAg-McHBcAb­HRP 的量与样 品 HBcAb 的量呈反比，故加入 TMB 后显色程度与 HBcAb 的量呈反 比；若样品中无 HBcAb，则显色达最深。 检测指标 包被 被测 酶结合物 ⑤． HBcAb HBcAg + HBcAb + HBcAb-HRP 显色（-） 四、试验操作——严格按试剂盒说明书进行 1、从冷藏箱中取出试剂盒反应板每种四个孔，在室温下平衡 30min，标记“＋， －，样品，空白”，同时将浓缩洗涤液作 1:20 稀释； 2、加待测样品 50µl，对照试剂各 1 滴（50µl）； 3、加酶结合物，每孔加入相应的酶复合物 1 滴，充分混匀后置 37℃ 30min； 4、洗板，弃去反应液，拍干；用稀释洗涤液注满每孔后静置 10～15s，弃去拍 35min 70min