实验教案 课程名称 医学微生物学 授课专业及层次 实验项目 实验4乙型肝炎病毒的抗原抗体检测 实验分组情况 6组 学时数3学时 熟悉乙型肝炎病毒 二对半”的由来及其临床意义 实验目的 2、掌拥乙型肝炎病毒“二对半”的检测原理 3、熟悉临床乙型肝炎病毒“二对半”检测试剂盒的应用 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原 或抗体仍保持其免疫学活性。 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性 又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相 载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗 实验原理 体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过 反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量 定的比例 加入酶反应的底 奶后， 底物被酶催化成为有色 物的量 与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量 析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法 达到很高的敏感度。 乙型肝炎病毒“二对半”检测试剂盒（五种），血液，一次性注射器， 一次 设备与材料 性试管，离心机，微量移液器，吸头，蒸馏水 恒温箱，吸水纸 操作重点 乙型肝炎病毒“二对半”的由来、临床意义 操作难点 乙型肝炎病毒“二对半”的检测原理 操作注意事项 加样时，试剂盒与反应板一一对应 教学法 启发、诱导式 实哈内容、步摩、要求及时间分 一、复习、总结上次实验的内容和注意事项 5min 二、乙型肝炎病毒“二对半”的由来及其临床意义 1、第一对：BsAg与Bs仙，乙型肝炎病毒表面抗原，位于Dane颗粒的外衣壳上 是Dane颗粒感染机体时被免疫系统识别的标志，并由此产生相应的免疫反应（细 胞免疫，体液免疫)，即BsAb出现。BsAg大量存在于感染者血液中是BV感 染的主要标志，而BsAb的存在则仅表明机体曾经或己经接触过BsAg。 2、第一对，HBeAg与HBeAb.HBeAg是prC翻加工后的产物，游离于血液中 其消长与病毒体及DA聚合酶的消长基本一致，可作为BV复制及具有强 感染性的标志：而且它还可能与BV的免疫耐受有关。而BeAg被机体免 疫系统识别后诱发产生的Bb可诱生补体介导的细胞毒作用，对BV 感染有一定的保护作用，也是预后良好的象征。 3、第三对：HBcAg与HBcAb,Hecag是Dane题粒的内衣壳蛋白外被贯穿HBeA 的包膜而被屏蔽， 一方面在血流中不易检出，另一方面Dae颗粒感染机体时它实 验 教 案 课程名称 医学微生物学 授课专业及层次 实验项目 实验 4 乙型肝炎病毒的抗原抗体检测 实验分组情况 6 组 学时数 3 学时 实验目的 1、熟悉乙型肝炎病毒“二对半”的由来及其临床意义 2、掌握乙型肝炎病毒“二对半”的检测原理 3、熟悉临床乙型肝炎病毒“二对半”检测试剂盒的应用 实验原理 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原 或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性， 又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相 载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗 体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过 反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一 定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量 与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分 析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法 达到很高的敏感度。 设备与材料 乙型肝炎病毒“二对半”检测试剂盒（五种），血液，一次性注射器，一次 性试管，离心机，微量移液器，吸头，蒸馏水，恒温箱，吸水纸 操作重点 乙型肝炎病毒“二对半”的由来、临床意义 操作难点 乙型肝炎病毒“二对半”的检测原理 操作注意事项 加样时，试剂盒与反应板一一对应 教学法 启发、诱导式 实验内容、步骤、要求及时间分配 一、复习、总结上次实验的内容和注意事项 二、乙型肝炎病毒“二对半”的由来及其临床意义 1、第一对:HBsAg 与 HBsAb,乙型肝炎病毒表面抗原，位于 Dane 颗粒的外衣壳上， 是 Dane 颗粒感染机体时被免疫系统识别的标志，并由此产生相应的免疫反应（细 胞免疫，体液免疫），即 HBsAb 出现。HBsAg 大量存在于感染者血液中是 HBV 感 染的主要标志，而 HBsAb 的存在则仅表明机体曾经或已经接触过 HBsAg。 2、第二对：HBeAg 与 HBeAb，HBeAg 是 PreC 翻译加工后的产物，游离于血液中， 其消长与病毒体及 DNA 聚合酶的消长基本一致，可作为 HBV 复制及具有强 感染性的标志；而且它还可能与 HBV 的免疫耐受有关。而 HBeAg 被机体免 疫系统识别后诱发产生的 HBeAb 可诱生补体介导的细胞毒作用，对 HBV 感染有一定的保护作用，也是预后良好的象征。 3、第三对：HBcAg 与 HBcAb，HBcAg 是 Dane 颗粒的内衣壳蛋白外被贯穿 HBeAg 的包膜而被屏蔽，一方面在血流中不易检出，另一方面 Dane 颗粒感染机体时它 5min 35min