实验十四还原糖和总糖含量的测定 (3,5二硝基水杨酸比色法) 一、目的 植物体内的还原糖，主要是萄萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物休内的分布 不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。 能形成其他物质如有机酸等：此外， 、蔬菜中含糖量的多 质的重要指标。还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如 淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本 原理，学习比色定糖法的基本操作，熟悉分光光度计的使用方法。 二、原理 各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解度不同，可 将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的 双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。 基5硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及 物。在一定节 内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在54O加m波书 下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖 和总糖的含量。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器 (1)刻度试管：25ml (2)离心管或玻璃漏斗2个 (3)烧杯：100ml1个 (4)三角瓶：100ml1个 (5)容量瓶：100ml3个 (6)刻度吸管：1ml1个，2ml4个，10ml1个 (7)恒温水浴 (8)沸水浴 (9)离心机（过滤法不用此设备） (10)由子天平 (11)分光光度计 2.试剂 (1)lmg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃ 烘至恒重)，置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中， 以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。 )3,5-二硝基水杨酸试剂：将6,3g3,5-二硝基水杨酸和262ml2mol NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚利 5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定客至1000ml,贮于棕色瓶中备用。 (3)碘一碘化钾溶液：称取sg碘和109碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。 实验十四 还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一、目的 植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布， 不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。还原糖还 能形成其他物质如有机酸等；此外，水果、蔬菜中含糖量的多少，也是鉴定其品 质的重要指标。还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如 淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本 原理，学习比色定糖法的基本操作，熟悉分光光度计的使用方法。 二、原理 各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解度不同，可 将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的 双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。 在碱性条件下，还原糖与 3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为 3-氨 基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。在一定范围 内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在 540nm 波长 下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖 和总糖的含量。 三、仪器、试剂和材料 1．仪器 （1）刻度试管：25ml （2）离心管或玻璃漏斗 2 个 （3）烧杯： 100ml 1 个 （4）三角瓶： 100ml 1 个 （5）容量瓶：100ml 3 个 （6）刻度吸管：lml 1 个，2ml 4 个，10mI 1 个 （7）恒温水浴 （8）沸水浴 （9）离心机（过滤法不用此设备） （10）电子天平 （11）分光光度计 2．试剂 （1）lmg／ml 葡萄糖标准液：准确称取 100mg 分析纯葡萄糖（预先在 80℃ 烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 100ml 的容量瓶中， 以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸试剂：将 6.3g 3,5-二硝基水杨酸和 262ml 2mol／L NaOH 溶液，加到 500ml 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定客至 1000ml，贮于棕色瓶中备用。 （3）碘一碘化钾溶液：称取 sg 碘和 109 碘化钾，溶于 100ml 蒸馏水中