核农学报 15卷 立大学的 Duane l. Johnson博士合作,开展了利用L. fendler与普通B.mqps栽培品种远缘属间 原生质体融合及离体诱变等高新技术来探讨改良L. fendler农艺性状、克服远缘属间杂交不 育的研究,以期建立优质工业用油的植物细胞育种体系,促进该植物向对人类有益的方向发 1材料与方法 供试材料为L. fendler和B.wqps属内普通栽培品种,将其种子经20%次氯酸钠消毒 15min,再用无菌水冲洗4次,接种在含2%蔗糖、0.5%琼脂的无刺激MS基本培养基上。在 25℃恒温箱中培养5~7d,取下胚轴和子叶制备原生质体,其方法参照文献 提取的下胚轴原生质体按6×10°/ml、子叶原生质体按3×10°/m的浓度培养在含有0.15M 山梨醇0.03MaCl22HO和0.5 M Tris hc的处理液中。用吸管滴7滴混合原生质体移入直 径为5cm的培养器中,加入由0.3M葡萄糖、50MCaC22HO配置成的40%PEG(聚乙二醇)2 滴,静置5min后,用由o.M葡萄糖、0.067M山梨醇0.067MaC22HO配置的13.3%PEG和 0.05M葡萄糖0.083M山梨醇0.083 MCaC22HO的洗液洗2次,每次5min,最后用培养液再 将混合原生质体置入盛有0.15M的山梨醇、0.03 MCac .2H.o、.075MK1和0.05Mis HC溶液的试管中用2、5、10、15G的o射线进行辐照处理。 经PEG和γ射线处理的混合原生质体置入B大量元素、微量元素和维生素且附加1.5mg 2,4D0.5 moNA和0. I mgr的Bs培养基上,在25℃暗光下培养48h后,用微操仪选取100个 融合原生质体转移到10m新鲜的P培养基上,3d后再加3mP培养基。 融合原生质体愈伤组织再分化培养分别用Bs和MS两种培养基,另外分别附加2mgKT、 gZT/L .2mgBA/L、mgZI+1mgKm、mgZI+1mgAL和 ImgKr+ ImgBA/L 2结果 2.1不同培养基对L. fendleri不同组织原生质体诱导率的影响 为探讨L. fendler原生质体的诱导表1不同培养基对不同来源原生质体出愈率的影响 率,选用下胚轴和子叶来制备原生质体,在 Table 1 Eifects on induction of calli from different P和B3基本培养基附加1.5mg2,4D、 tissue protoplast cultured in Ps and Bs mediun 0.mNAA和0.1mgK进行培养,在同一种培养基原生质体来源出愈率 培养基上,下胚轴原生质体比子叶原生质四四四四 体诱导出的愈伤组织出愈率高(表1)。而 来源同一组织的原生质体在不同的培养基 子叶 上培养,B培养基比Bs培养基诱导的出 下胚轴 愈率高(表1) 2.2辐照和PEG处理不同组织制备的原 生质体对融合频率的影响 301994-2008ChinaacademicJournalElectronicPublishingHousedllrightsreservedhtp/www.cnkinet立大学的Duane L.Johnson 博士合作 ,开展了利用 L . fendleri 与普通B . napus 栽培品种远缘属间 原生质体融合及离体诱变等高新技术来探讨改良 L . fendleri 农艺性状、克服远缘属间杂交不 育的研究 ,以期建立优质工业用油的植物细胞育种体系 ,促进该植物向对人类有益的方向发 展。 1 材料与方法 供试材料为 L . fendleri 和 B . napus 属内普通栽培品种 ,将其种子经 20 %次氯酸钠消毒 15min ,再用无菌水冲洗 4 次 ,接种在含 2 %蔗糖、015 %琼脂的无刺激 MS 基本培养基上。在 25 ℃恒温箱中培养 5～7d ,取下胚轴和子叶制备原生质体 ,其方法参照文献 [8、9 ] 。 提取的下胚轴原生质体按 6 ×105Πml、子叶原生质体按 3 ×105Πml 的浓度培养在含有 0115M 山梨醇、0103MCaCl2·2H2O 和 015M Tris2HCl 的处理液中。用吸管滴 7 滴混合原生质体移入直 径为 5cm 的培养器中 ,加入由 013M 葡萄糖、50MCaCl2 ·2H2O 配置成的 40 %PEG(聚乙二醇) 2 滴 ,静置 5min 后 ,用由 011M 葡萄糖、01067M 山梨醇、01067MCaCl2·2H2O 配置的 1313 %PEG和 0105M 葡萄糖、01083M 山梨醇、01083MCaCl2·2H2O 的洗液洗 2 次 ,每次 5min ,最后用培养液再 洗 2 次。 表 1 不同培养基对不同来源原生质体出愈率的影响 Table 1 Effects on induction of calli from different tissue protoplast cultured in P8 and B5 medium 培养基 medium 原生质体来源 source of protoplast 出愈率 percentage of callus( %) P8 下胚轴 hypocotyls 0184 子叶 cotyledon 0162 B5 下胚轴 hypocotyls 0156 子叶 cotyledon 0148 将混合原生质体置入盛有 0115M 的山梨醇、0103MCaCl2 ·2H2O、01075MKCl 和 0105Mtris2 HCl 溶液的试管中 ,用 2、5、10、15Gy 的 60Coγ射线进行辐照处理。 经 PEG和γ射线处理的混合原生质体置入 P8 大量元素、微量元素和维生素且附加 115mg 2 ,42D、015mgNAA 和 011mgKT的 B5 培养基上 ,在 25 ℃暗光下培养 48h 后 ,用微操仪选取 100 个 融合原生质体转移到 10ml 新鲜的 P8 培养基上 ,3d 后再加 3ml P8 培养基。 融合原生质体愈伤组织再分化培养分别用 B5 和 MS 两种培养基 ,另外分别附加 2mgKTΠL、 2mgZTΠL、2mgBAΠL、1mgZT + 1mgKTΠL、1mgZT + 1mgBAΠL 和 1mgKT + 1mgBAΠL。 2 结果 211 不同培养基对 L . fendleri 不同组织原生质体诱导率的影响 为探讨 L . fendleri 原生质体的诱导 率 ,选用下胚轴和子叶来制备原生质体 ,在 P8 和 B5 基本培养基附加 115mg 2 , 42D、 015mgNAA 和 011mgKT进行培养 ,在同一种 培养基上 ,下胚轴原生质体比子叶原生质 体诱导出的愈伤组织出愈率高 (表 1) 。而 来源同一组织的原生质体在不同的培养基 上培养 , P8 培养基比 B5 培养基诱导的出 愈率高(表 1) 。 212 辐照和 PEG处理不同组织制备的原 生质体对融合频率的影响 643 核 农 学 报 15 卷 © 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net