L. fender与B.nqps原生质体融合改良野生优质工业用油植物研究 347 图1显示了经不同辐照剂量和PEG处理L. fendler和B.mps下胚轴、子叶制备的原生质 体相互融合的结果。从图中可以看到,不论是来源下胚轴、子叶原生质体交叉混合处理,还是 分别来源下胚轴、子叶原生质体对原生质体的混合处理,两种处理均比对照的原生质体融合频 率高。而处理剂量相同时,L. fendler下胚轴原生质体与N.maps子叶原生质体融合的细胞频 率比不同来源的下胚轴原生质体、子叶原生质体间融合的细胞频率低;来源于下胚轴间的原生 质体融合细胞频率低于来源于子叶间的原生质体融合频率;经低剂量γ射线(2~5)处理不 同亲本来源的混合原生质体,其融合原生质体细胞数比PEG处理的高,说明低剂量辐照处理 对原生质体融合有一定促进作用,其适宜剂量为5G以下,反之则随着剂量增高而原生质体融 合细胞数日减少,处理剂量达15G时,融合的原生质体数接近于零(图1)。 0.6 Y射线处理子叶与子叶原生质体合 protoplast fusion between Y射浅处玛下胚输与下胚轴原生质体融合 protoplast fusion betwe Δ-￥线处理子叶与下胚轴原生质体融合 protoplast fusion between cotyledons and 一PEG处理子叶原生质体融合 protoplast fusion coty ledon 一米PEG处理下胚轴与下胚轴原生质体融合 rotoplast fusion between 处理子叶与下胚轴原生质体融合 protoplast fusion between coty ledong and hypocotyls treated with 图1不同处理对原生质体融合的影响 Fig. 1 Eifect on percentage of protoplast fusion treated with Y rays and PEG 2.3不同培养基及激素配比对融合原生质体愈伤组织再分化的影响 L. fender下胚轴、子叶原生质体以及融合原生质体愈伤组织分别转移到含有2mgZI、 2 mgBA L2mgKm、mgr+1mgK、mgZI+1 mgBAlL、mgA+1mgK不同配比生长激素的 Bs和B培养基上,原生质体愈伤组织在分化频率上存在差异。单从L. fendleri原生质体愈伤 组织再分化的情况来看,来源于下胚轴的原生质体产生的愈伤组织在培养基条件完全相同的 情况下,比来源于子叶的原生质体愈伤组织再分化频率高;基本培养基不同,在附加激素水平 相同的条件下,R培养基诱导融合原生质体愈伤组织的出愈率要优于B3培养基。而在诱导 愈伤组织再分化方面B3培养基优于P(图2),而且B3培养基对诱导融合原生质体的出愈率 最高。另外,2~5辐照处理原生质体有助于提高其原生质体再分化能力 2.4原生质体植株及原生质体融合杂种植株农艺性状表现 L. fendler原生质体再生植株的株型、叶型、花类型、育性完全保持了原来亲本性状,只是 301994-2008ChinaacademicJournalElectronicPublishingHousedllrightsreservedhtp/www.cnkinet图 1 显示了经不同辐照剂量和 PEG处理 L . fendleri 和B . napus 下胚轴、子叶制备的原生质 体相互融合的结果。从图中可以看到 ,不论是来源下胚轴、子叶原生质体交叉混合处理 ,还是 分别来源下胚轴、子叶原生质体对原生质体的混合处理 ,两种处理均比对照的原生质体融合频 率高。而处理剂量相同时 ,L . fendleri 下胚轴原生质体与 N. napus 子叶原生质体融合的细胞频 率比不同来源的下胚轴原生质体、子叶原生质体间融合的细胞频率低 ;来源于下胚轴间的原生 质体融合细胞频率低于来源于子叶间的原生质体融合频率 ;经低剂量γ射线(2～5Gy) 处理不 同亲本来源的混合原生质体 ,其融合原生质体细胞数比 PEG处理的高 ,说明低剂量辐照处理 对原生质体融合有一定促进作用 ,其适宜剂量为 5Gy 以下 ,反之则随着剂量增高而原生质体融 合细胞数目减少 ,处理剂量达 15Gy 时 ,融合的原生质体数接近于零(图 1) 。 图 1 不同处理对原生质体融合的影响 Fig. 1 Effect on percentage of protoplast fusion treated withγrays and PEG 213 不同培养基及激素配比对融合原生质体愈伤组织再分化的影响 L . fendleri 下胚轴、子叶原生质体以及融合原生质体愈伤组织分别转移到含有 2mgZTΠL、 2mgBAΠL、2mgKTΠL、1mgZT + 1mgKTΠL、1mgZT + 1mgBAΠL、1mgBA + 1mgKTΠL 不同配比生长激素的 B5 和 P8 培养基上 ,原生质体愈伤组织在分化频率上存在差异。单从 L . fendleri 原生质体愈伤 组织再分化的情况来看 ,来源于下胚轴的原生质体产生的愈伤组织在培养基条件完全相同的 情况下 ,比来源于子叶的原生质体愈伤组织再分化频率高 ;基本培养基不同 ,在附加激素水平 相同的条件下 ,P8 培养基诱导融合原生质体愈伤组织的出愈率要优于 B5 培养基。而在诱导 愈伤组织再分化方面 ,B5 培养基优于 P8 (图 2) ,而且 B5 培养基对诱导融合原生质体的出愈率 最高。另外 ,2～5Gy 辐照处理原生质体有助于提高其原生质体再分化能力。 214 原生质体植株及原生质体融合杂种植株农艺性状表现。 L . fendleri 原生质体再生植株的株型、叶型、花类型、育性完全保持了原来亲本性状 ,只是 6 期 L . fendleri 与 B . napus 原生质体融合改良野生优质工业用油植物研究 743 © 1994-2008 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net