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吸管吹打骨髓细胞使其分散。 3)低渗处理:假如预热37℃的低渗液至7m1,用吸管轻轻吹打混匀, 置于37℃恒温水浴锅中,保温30分钟后取出,然后加入1ml新配制的甲醇 冰醋酸(3:1固定液)预固定,混匀后以800~1000转/分离心8分钟。 4)固定:弃去上清液。留下沉淀物加入固定液5ml,用吸管吹打混匀, 室温放置30分钟,离心。 5)再固定:方法同4。 6)制备细胞悬液:弃去上清液,留下沉淀物,加入新鲜固定液0.2~ 0.4l(视细胞多少而定)混匀,制成细胞悬液。 7)滴片:用吸管吸取细胞悬液少许,滴在清洁预冷的载玻片上,每 片滴2~3滴(不要重叠),然后顺玻片斜面用口轻轻吹散,晾干或酒精等火 焰干燥。 8)染色:用Giemsa原液和磷酸盐缓冲液(pH6.8)l:9配成Giemsa 染液,在玻片标本上滴几滴Giemsa染液铺匀。染色约为10分钟,倒去染液, 用自来水缓缓冲洗干净,晾干。 (2)观察:将标本细胞面朝上,置于低倍镜下观察,可见有较大的 原形的间期细胞核,寻找染色体分散的中期分裂相,移至视野中央,然后转 换油镜观察。 细胞中染色体的计数:为了避免计数时重复和遗漏,在计数前应先按该 细胞的染色体自然分布状态,大致划分为几个区域,然后按顺序数出各区域 染色体的实际数目,最后加在一起,即为该细胞染色体的总数。大鼠二倍体 细胞染色体数目,2n=42。 2. 实验动物染色体核型的观察 家兔、大白鼠、大。蜍等动物常作为生物学和医学的实验动物,如肿瘤 致畸等都是以动物为模型。因此,医学学生了解这些实验动物的核型非常必 (1)家兔染色体核型:家兔二倍体细胞中染色体,2=44,其雄性染色 体为XY型,雌性为XX型,油镜下可见到细胞中有三种类型的染色体:即 中央着丝粒染色体、亚中着丝粒染色体和近端着丝粒染色体。按照染色体大 小和着丝粒的位置可将染色体分为五组。 组号 染色体号 形态大小 着丝粒位置 A组 1~2 最大 中央 B组 3-8+X 较大 亚中,X在5~6之间 C组 913 中等 9号中央,余为亚中 D组 1417 较小 中央 E组 18~21+y 最小 近端,Y在19~20之间 2 吸管吹打骨髓细胞使其分散。 3) 低渗处理:假如预热 37℃的低渗液至 7ml,用吸管轻轻吹打混匀, 置于 37℃恒温水浴锅中,保温 30 分钟后取出,然后加入 1ml 新配制的甲醇、 冰醋酸(3:1 固定液)预固定,混匀后以 800~1000 转/分离心 8 分钟。 4) 固定:弃去上清液。留下沉淀物加入固定液 5ml,用吸管吹打混匀, 室温放置 30 分钟,离心。 5) 再固定:方法同 4。 6) 制备细胞悬液:弃去上清液,留下沉淀物,加入新鲜固定液 0.2~ 0.4ml(视细胞多少而定)混匀,制成细胞悬液。 7) 滴片:用吸管吸取细胞悬液少许,滴在清洁预冷的载玻片上,每 片滴 2~3 滴(不要重叠),然后顺玻片斜面用口轻轻吹散,晾干或酒精等火 焰干燥。 8) 染色:用 Giemsa 原液和磷酸盐缓冲液(pH6.8)1:9 配成 Giemsa 染液,在玻片标本上滴几滴 Giemsa 染液铺匀。染色约为 10 分钟,倒去染液, 用自来水缓缓冲洗干净,晾干。 (2) 观察:将标本细胞面朝上,置于低倍镜下观察,可见有较大的 原形的间期细胞核,寻找染色体分散的中期分裂相,移至视野中央,然后转 换油镜观察。 细胞中染色体的计数:为了避免计数时重复和遗漏,在计数前应先按该 细胞的染色体自然分布状态,大致划分为几个区域,然后按顺序数出各区域 染色体的实际数目,最后加在一起,即为该细胞染色体的总数。大鼠二倍体 细胞染色体数目,2n=42。 2. 实验动物染色体核型的观察: 家兔、大白鼠、大蟾蜍等动物常作为生物学和医学的实验动物,如肿瘤, 致畸等都是以动物为模型。因此,医学学生了解这些实验动物的核型非常必 要。 (1)家兔染色体核型:家兔二倍体细胞中染色体,2n=44,其雄性染色 体为 XY 型,雌性为 XX 型,油镜下可见到细胞中有三种类型的染色体:即 中央着丝粒染色体、亚中着丝粒染色体和近端着丝粒染色体。按照染色体大 小和着丝粒的位置可将染色体分为五组。 组号 染色体号 形态大小 着丝粒位置 A 组 B 组 C 组 D 组 E 组 1~2 3~8+X 9~13 14~17 18~21+Y 最大 较大 中等 较小 最小 中央 亚中,X 在 5~6 之间 9 号中央,余为亚中 中央 近端,Y 在 19~20 之间
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