实验步骤 ■培养细胞(96孔板,每组3正常、3损伤、3损伤恢复) PBS洗3次(轻轻地摇动洗涤) ■甲醇固定10min ■PBS洗3次(轻轻地洗涤) 加入封闭液(1:10)25μ,37℃,30mn以上 加一抗(1:300)25μ,37℃,1h以上(或4℃过夜) PBS洗3次(轻轻地摇动洗涤) 加二抗(1 mI Pbs加入生物素化山羊抗小鼠IgG10) 25{,37℃,1h以上 ■PBS洗3次(轻轻地摇动洗涤)实验步骤 ◼ 培养细胞（96孔板，每组3正常、3损伤、3损伤恢复） ◼ PBS 洗3次 (轻轻地摇动洗涤) ◼ 甲醇固定10min ◼ PBS 洗3次 (轻轻地洗涤) ◼ 加入封闭液（1:10） 25µl，37 ℃，30min以上 ◼ 加一抗（1:300）25µl，37℃，1h以上 (或4℃过夜) ◼ PBS 洗3次 (轻轻地摇动洗涤) ◼ 加二抗（1ml PBS加入生物素化山羊抗小鼠IgG 10µl） 25µl，37 ℃，1h以上 ◼ PBS 洗3次 (轻轻地摇动洗涤)