第1期 邓秀新等:柑桔原生质体培养与融合研究 表1原生质体再生植株的柑桔种类 起始材料 作者和年份 甜橙C. sInensIs 锦橙 性愈伤 邓秀新等,1988 胚性愈伤 邓占鳌等,1989 朋娜’脐橙 胚状体子叶 叶新荣等,1993 伏令夏 悬浮系 等,1993 宽皮桔C. redial ta 胚性愈伤 胚性愈伤 邓秀新等,1988 柠橡C. [imon 性愈伤 甘等,1993 桔橙杂种 悬浮系 甘霖等,1993 C. sinensis Fortunella hindsii 性愈伤 邓秀等,1989 技术克服了性器官败育的障碍, Kobayashi等获得了耱性败育的温州蜜钳(C. unshiu)与雌雄 性器官均败育的脐橙(C. sinensis,种间体细胞杂种25. Grosser等实现了柑桔属( Citrus)与 有性不亲和的近缘非洲樱饼桔( Catopsis)和蠊壳刺属( severinia)的融合,首次获得属间 杂种21.23,展示了这一技术的巨大潜力 本研究采用粲乙二醇(PEG)诱导融合方法,将一个亲本的悬浮细胞系或胚性愈伤组织的 原生质体与另一个亲本的叶肉原生质体融合,经浅层双层-固体培养体系再生成植株(表2 列出了本研究获得的柑桔体细胞杂种).该融合技术体系利用叶肉一方在所用的培养条件下 无法再生这一特点作为选择条件,所以再生植株中有几种类型,即体细胞杂种,胚性亲本以 及胚性亲本自发融合类型.再生植株必须经过遗传鉴定方可确定,本研究主要采用叶片形态, 染色体数目以及多种同工酶等指标,.柑桔种属间叶片形态差异较大,如枳( Poncirus trifolia) 具三出复叶.这一性状为显性遗传.因此,以其为亲本的融合组合再生植株中,如某植株具 有三叶性状,就可初步认为含有枳的基因.在宜昌橙(C. ichangensis)与伏令夏甜橙的融合 组合中,宜昌橙翼叶较大,后代很容易识别920.26.同工酶分析经济方便,绝大多数同工 酶表现十分稳定,已广泛应用于柑桔体细胞杂种的鉴别中 通过原生质体融合技术,经以上三项指标鉴定,日前已得到2个柑桔属间及5个种间体 细胞杂种(见表2).这些组合并非是随意地选择的,如金柑与甜橙属间融合希望将金柑的抗 寒性以及一年多次开花的特性转移到不耐寒的优良甜橙品种中去.本结果也是首次实现柑桔 类植物果实经济价值最大的二属间的融合 32体细胞杂种再生 32.1基因型的影响 基因型对融合体再生能力有明显的影响.对目前世界上60多个柑桔种间及属间体细胞 杂种亲本组成分析,发现有55%的组合含有甜橙(C. sinensis)这个种.为进一步分析这,同 题,本研究在同一条件下进行了不同基因型对融合体再生影响的试验.结果表明,不管是作 201994-2008ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.aLlrightsreservedhttp://www.cnki.net第 期 邓秀新等 柑桔原生质体培养 与融合研究 表 原生质体再生植株的柑枯种类 】 起始材料 作者和年份 附溯 种类或品种 甜橙 泣”印 台 ‘ 锦橙 ’ ‘ 桃 叶橙 ’ ‘ 朋娜 ’ 脐橙 ‘ 伏令夏 ’ 宽皮枯 耐口 。 ‘ 本地早 ’ ‘ 碰柑 ’ 柠檬 如 桔橙杂种 以 硕侧 止陀即 山金柑 几对 陀 胚性愈伤 胚性愈伤 胚状体子叶 悬浮 系 邓秀新等 , 邓 占获等 , 叶新荣等 , 甘 霖等 , 胚性愈伤 胚性愈伤 胚性愈伤 邓 秀新等 , 邓秀新等 , 甘 霖等 , 悬浮系 甘 霖等 , 卯 胚性愈伤 邓 秀新等 , 兜 技术 克服 了性器官败育 的障碍 , 等获得 了雄性败育 的温 州蜜柑 溯 与雌 雄 性 器官均败育的脐橙 、 的种 间体细胞杂种 等实 现 了柑 桔 属 、, 与 有性不 亲和 的近缘植物非洲樱桃桔 和 赚壳刺属 的融 合 , 首 次 获得 属 间 杂种 , , 展示 了这一技术 的巨大潜力 本研究 采用 聚乙 二醇 诱导融合方法 , 将一个亲本的悬浮细胞系或胚性愈伤组织的 原生质体与另 一个亲本的叶 肉原生质体融合 , 经浅层 一 双层 一 固体培养体系再 生成植株 表 列 出了本研究 获得的柑桔体细胞杂种 该融合技术体系利用叶肉一 方 在 所 用 的培 养条件 下 无法再生这 一特点作为选择条件 , 所 以再生植株 中有几种类型 , 即体细胞杂种 , 胚性 亲本以 及胚性亲本 自发融合类型 再生植株必须经过遗传鉴定方可 确定 本研究 主要采用叶片 形态 , 染 色 体数 目以 及 多 种 同工 酶 等指 标 柑桔种属间叶片形态差异较大 如积 、 具 三 出复 叶 这 一性状为显性 遗传 因此 , 以其为亲本的融合组合再生植株 中 , 如某植株具 有 三 叶性状 , 就可初步认为含有积 的基 因 在 宜 昌橙 与伏令 夏 甜 橙 的融 合 组合 中 , 宜 昌橙翼 叶较大 , 后代很容易识别【’, , 同工 酶 分 析 经 济方 便 , 绝大 多数 同工 酶表现 十分稳定 , 已广泛应用 于柑桔体细胞杂种 的鉴别 中 通过原生质体融合技术 , 经 以上三项指标鉴定 , 目前 已得 到 个柑桔属 间及 个种 间体 细胞杂种 见表 这些组合并非是 随意地 选择的 , 如金柑与甜橙属 间融合希望将金柑 的抗 寒性 以及一年多次开花 的特性转移到不耐寒的优 良甜橙 品种 中去 本结果 也是首次实现柑桔 类植物果实经济价值最大的二 属 间的融合 体细胞杂种再生 基因型 的影 响 基 因型 对融合体再生能力有 明显 的影 响 对 目前世界 上 多 个 柑 桔 种 间及 属 间体细 胞 杂种亲本组成分 析 , 发现有 的组合含有甜橙 认 这个种 为进一步分析这 下 问 题 , 本研究在 同一条件下进行 了不 同基 因型对融合体再生影 响的试验 结果表 明 , 不管是作