第六章分子细胞遗传学相关实验 实验一 荧光原位杂交技术 一、实验目的 1熟悉荧光原位杂交技术的原理和方法， 2熟悉荧光原位杂交技术的应用。 二、实验原理 经对探针和靶DNA变性处理成单链后，用生物素标记的核苷酸探针与 间期核内或染色体上的靶DNA进行原位杂交，再用荧光标记的生物素亲和 蛋白和抗亲和蛋白的抗体作用，使探针杂交区信号放大发出荧光，可用荧光 显微镜检测，以确定DNA或基因或染色体是否有异常。目前，该技术已厂 泛用于动植物基因组结构研究、临床医学中基因、染色体异常的检测和研究 肿瘤遗传学的研究等方面。 三、器材与试剂 1.器材：荧光显微镜、烤箱、恒温培养箱、冰箱、水浴箱（两个）、Eppendorf 离心机、染缸（至少12个人加样枪(1~20μL,10100μ1,100-1000μ1）、避 光杂交盒、盖玻片、计时器、塑料盖玻片或塑料薄膜、镊子、钻石笔、浮漂。 2.试剂： (1)试剂盒成分 主要成分：探针5人份，探针位置Yq12 I:杂交液60μ1，：BlockingI1200L,Ⅲ：FITC-avidin1200μl V:BlockingⅡ600ul,V:Anti-avidin600μl,M:PW/antifade80μl 试剂盒中未包括的试剂：甲酰胺、氯化钠、柠檬酸三钠、土温20、Rubber Cement、乙醇。 (2)荧光原位杂交相关溶液的配制： 1.70%甲酰胺/2×SSC:35ml甲酰胺，5ml20×SSC,10m1水，混匀。 2.50%甲酰胺/2×SSC:100ml甲酰肢，20ml20×SSC,80ml水，混匀，分 装在4个染缸中。 3.洗脱液：90m120×SSC,加水至450ml,加土温20450μ1，混匀， 每次洗脱倒出150ml,分装在3个染缸中。 4.20×SSC:氯化钠175.3克，柠檬酸钠88.2克，定溶至1000ml蒸馏1 第六章 分子细胞遗传学相关实验 实验一 荧光原位杂交技术 一、实验目的 1.熟悉荧光原位杂交技术的原理和方法。 2.熟悉荧光原位杂交技术的应用。 二、实验原理 经对探针和靶 DNA 变性处理成单链后，用生物素标记的核苷酸探针与 间期核内或染色体上的靶 DNA 进行原位杂交，再用荧光标记的生物素亲和 蛋白和抗亲和蛋白的抗体作用，使探针杂交区信号放大发出荧光，可用荧光 显微镜检测，以确定 DNA 或基因或染色体是否有异常。目前，该技术已广 泛用于动植物基因组结构研究、临床医学中基因、染色体异常的检测和研究、 肿瘤遗传学的研究等方面。 三、器材与试剂 1.器材：荧光显微镜、烤箱、恒温培养箱、冰箱、水浴箱（两个）、Eppendorf 离心机、染缸（至少 12 个）、加样枪（1~20μl,10~100μl,100~1000μl）、避 光杂交盒、盖玻片、计时器、塑料盖玻片或塑料薄膜、镊子、钻石笔、浮漂。 2.试剂： （1）试剂盒成分 主要成分：探针 5 人份，探针位置 Yq12 Ⅰ：杂交液 60μl ，Ⅱ：BlockingⅠ1200μl, Ⅲ：FITC-avidin 1200μl, Ⅳ：Blocking Ⅱ600μl, Ⅴ：Anti-avidin600μl ,Ⅵ：PI/antifade80μl 试剂盒中未包括的试剂：甲酰胺、氯化钠、柠檬酸三钠、土温 20、Rubber Cement、乙醇。 （2）荧光原位杂交相关溶液的配制： 1.70%甲酰胺/2×SSC:35ml 甲酰胺,5ml 20×SSC,10ml 水，混匀。 2.50%甲酰胺/2×SSC:100ml 甲酰胺,20ml 20×SSC,80ml 水，混匀，分 装在 4 个染缸中。 3.洗脱液：90ml20×SSC，加水至 450ml，加土温 20 450μl，混匀， 每次洗脱倒出 150ml，分装在 3 个染缸中。 4. 20×SSC：氯化钠 175.3 克，柠檬酸钠 88.2 克，定溶至 1000ml 蒸馏