RFLP(限制性片段长度多态性Restriction Fragment Length Polymorphism)RFLP技术 是用特定的方法将生物DNA提取出来，用己知的限制性内切酶消化，电泳印迹，再用DNA 探针杂交并放射自显影，从而得到与探针同源的DNA序列在长度上的差异。 RAPD(随机扩增多态性DNA Randomly Amplified Polymorphic DNA)RAPD技术是 利用一个随机序列的寡核苷酸作引物，通常为10个核苷酸，以生物的基因组DNA作模板 进行PCR扩增反应，经琼脂糖凝胶电泳来检测DNA序列的多态性。 AFLP(扩增片段长度多态性Amplified Fragment Length Polymorphism)AFLP的基本 原理是对基因组DNA限制性内切酶酶切片段的选择性扩增。限制性内切酶片段首先与含有 与其共同顺序粘性末端的双链人工合成接头连接，连接后的粘性末端顺序和接头顺序就作为 以后PCR反应的引物结合位点。实践中根据需要通过选择在引物3'端上分别加1~3个选 择性核苷酸的不同引物，可以达到选择性扩增的目的。这些选择性核苷酸使引物选择性地识 别具有特异配对顺序的内切酶酶切片段，并与之结合，实现特异性扩增。然后把扩增的酶切 片段在高分辨率的顺序分析胶上电泳，产生扩增片段长度不同的多态性带型。 染色体原位杂交(Chromosome in situ hybridization)染色体原位杂交是细胞学方法和 分子杂交技术相结合的产物，是指利用特异性核酸片段作探针，直接同染色体的DNA片段 杂交，在染色体上显示特异的DNA或RNA。 分子标记可以为种质资源的研究提供几乎无限的多态性证据，成为检测遗传多样性的最 有效工具。例如：Brauner(1992)对濒危原始被子植物Lactoris femandeziana的研究表明， 在2532条RAPD谱带中，只有41条具多态性，只占1.6%，认为这可能是其濒危的一个原 因。又如通过对小麦、水稻、玉米、大豆等作物分子标记的比较研究，发现普通小麦品种间 的等位变异比其它作物要小得多，说明普通小麦的遗传基础更为狭窄，这可能是杂交小麦比 其它作物较难取得突破的一个原因（贾继增，1996）。分子标记还可以用于核心种质(cor collection)资源的确定(Mcferson,I998)。核心种质资源要求以最低的成本而能最大限度 地代表资源的遗传多样性。这样在资源保存方面，通过分子标记进行资源鉴定，可以避免在 资源保存中经常发生的重复、混淆。 园艺工作者在20世纪末的近20年间利用上述蛋白质和DNA鉴定技术除进行园艺种质 资源的遗传多样性研究（张开春等，1997，苹果）外，还进行了园艺种类品种鉴别和系谱分 析(Jiang Pingren等，1994，中国甘蓝：Jan等，1994，菊科：张新露，1995，丁香)、杂种 鉴定和预先选择（张潞生等，1987，桃：Hormaza等，1994，阿月浑子）、构建遗传图谱和 基因定位(Lames Nienhuis等，1994，西红柿)、性别鉴定(Zhang Lusheng等，2000，猕猴 桃)以及抗性育种(J.Villand等，2000，甜椒)等多个领域的研究。与大田作物如水稻、玉 米、大豆等相比，在研究深度及技术应用等方面还有所欠缺，园艺作物在许多种类品种上的 研究还停留在技术方法的探索和引用阶段（张潞生等，1999），而且重要的园艺作物种类品 种之间研究水平的差距很大。随着遗传学，特别是分子遗传学的飞速发展，已经和还将发明 的很多新的鉴定技术将用于园艺种质资源研究。因此，根据已经或者将要面临的问题，积极 采用先进和适宜的研究手段，才能使园艺种质资源的研究鉴定逐步深入下去。 1.5.2种质资源的评价 在搜集、保存、研究鉴定种质资源的基础上，对种质资源进行恰如其分的评价，是有效 1616 RFLP（限制性片段长度多态性 Restriction Fragment Length Polymorphism） RFLP 技术 是用特定的方法将生物 DNA 提取出来，用已知的限制性内切酶消化，电泳印迹，再用 DNA 探针杂交并放射自显影，从而得到与探针同源的 DNA 序列在长度上的差异。 RAPD（随机扩增多态性 DNA Randomly Amplified Polymorphic DNA） RAPD 技术是 利用一个随机序列的寡核苷酸作引物，通常为 10 个核苷酸，以生物的基因组 DNA 作模板 进行 PCR 扩增反应，经琼脂糖凝胶电泳来检测 DNA 序列的多态性。 AFLP（扩增片段长度多态性 Amplified Fragment Length Polymorphism） AFLP 的基本 原理是对基因组 DNA 限制性内切酶酶切片段的选择性扩增。限制性内切酶片段首先与含有 与其共同顺序粘性末端的双链人工合成接头连接，连接后的粘性末端顺序和接头顺序就作为 以后 PCR 反应的引物结合位点。实践中根据需要通过选择在引物 3′端上分别加 1~3 个选 择性核苷酸的不同引物，可以达到选择性扩增的目的。这些选择性核苷酸使引物选择性地识 别具有特异配对顺序的内切酶酶切片段，并与之结合，实现特异性扩增。然后把扩增的酶切 片段在高分辨率的顺序分析胶上电泳，产生扩增片段长度不同的多态性带型。 染色体原位杂交（Chromosome in situ hybridization） 染色体原位杂交是细胞学方法和 分子杂交技术相结合的产物，是指利用特异性核酸片段作探针，直接同染色体的 DNA 片段 杂交，在染色体上显示特异的 DNA 或 RNA。 分子标记可以为种质资源的研究提供几乎无限的多态性证据，成为检测遗传多样性的最 有效工具。例如：Brauner（1992）对濒危原始被子植物 Lactoris femandeziana 的研究表明， 在 2532 条 RAPD 谱带中，只有 41 条具多态性，只占 1.6％，认为这可能是其濒危的一个原 因。又如通过对小麦、水稻、玉米、大豆等作物分子标记的比较研究，发现普通小麦品种间 的等位变异比其它作物要小得多，说明普通小麦的遗传基础更为狭窄，这可能是杂交小麦比 其它作物较难取得突破的一个原因（贾继增，1996）。分子标记还可以用于核心种质（core collection）资源的确定（Mcferson，1998）。核心种质资源要求以最低的成本而能最大限度 地代表资源的遗传多样性。这样在资源保存方面，通过分子标记进行资源鉴定，可以避免在 资源保存中经常发生的重复、混淆。 园艺工作者在 20 世纪末的近 20 年间利用上述蛋白质和 DNA 鉴定技术除进行园艺种质 资源的遗传多样性研究（张开春等，1997，苹果）外，还进行了园艺种类品种鉴别和系谱分 析（Jiang Pingren 等，1994，中国甘蓝；Jan 等，1994，菊科；张新露，1995，丁香）、杂种 鉴定和预先选择（张潞生等，1987，桃；Hormaza 等，1994，阿月浑子）、构建遗传图谱和 基因定位（Lames Nienhuis 等，1994，西红柿）、性别鉴定（Zhang Lusheng 等，2000，猕猴 桃）以及抗性育种（J.Villand 等，2000，甜椒）等多个领域的研究。与大田作物如水稻、玉 米、大豆等相比，在研究深度及技术应用等方面还有所欠缺，园艺作物在许多种类品种上的 研究还停留在技术方法的探索和引用阶段（张潞生等，1999），而且重要的园艺作物种类品 种之间研究水平的差距很大。随着遗传学，特别是分子遗传学的飞速发展，已经和还将发明 的很多新的鉴定技术将用于园艺种质资源研究。因此，根据已经或者将要面临的问题，积极 采用先进和适宜的研究手段，才能使园艺种质资源的研究鉴定逐步深入下去。 1.5.2 种质资源的评价 在搜集、保存、研究鉴定种质资源的基础上，对种质资源进行恰如其分的评价，是有效