汁。目前这些物质已被已知成分的营养物质所替代。在许多例子中还发现，有些抽提液对细 胞有毒性。目前仍在广泛使用的是椰子汁，在培养基中浓度是 1～15mmol／L。 目前应用最广泛的基础培养基主要有 MS、B5、E1、N6、NN 和 L2 等（表 14-3）。 2、培养基的制备 培养基中使用的无机盐、碳源、维生素和生长激素应该采用高纯度级的药品。生长激 素、2，4-D 和 NAA 等在使用前需要重结晶提纯，其酒精一水溶液要用吸附法脱色处理。对 于像 2，4-D、IAA 和 NAA 这样难溶于水的试剂，配溶液时可先溶于 2～5ml 酒精中，然后慢 慢加入蒸馏水，稍微加热，稀释至所需体积，再调节 pH。配制培养基应采用蒸馏水或者高 纯度的去离子水。在培养基配制过程中可用 0.5mol/L 的 HCl 或 0.2mol／LNaOH 调节 pH，固 体培养基加入琼脂 0.6%～1.0%，120℃蒸汽灭菌 15～20min。对于一些热敏性化合物，应该 用过滤法灭菌，如 L-谷氨酰胺、植物生长激素、椰子汁等，然后再按无菌操作加入到已灭 菌的培养基中。 由于培养基配比中有些组分量很小，种类又很多，配制起来很繁琐。因此往往把培养 基配成使用浓度的 10 倍或者 100 倍的母液，分成小瓶后冷冻保存，使用时再稀释到正常浓 度。经稀释后的培养基应放在 10℃以下冰箱中保藏。为了防止在高浓度下培养基组分间相 互作用产生沉淀，CaCl2、KI 和 EDTA 钠铁盐等要单独配制保存，使用时再稀释混合。 二、植物细胞培养流程和方法 植物细胞培养与微生物细胞培养类似，可采用液体培养基进行悬浮培养。植物组织细胞 的分离，一般采用次亚氯酸盐的稀溶液、福尔马林、酒精等消毒剂对植物体或种子进行灭菌 消毒。种子消毒后在无菌状态下发芽，将其组织的一部分在半固体培养基上培养，随着细胞 增殖形成不定形细胞团(愈伤组织)，将此愈伤组织移入液体培养基振荡培养。如植物体也可 采用同样方法将消毒后的组织片愈伤化，可用液体培养基振荡培养，愈伤化时间随植物种类 和培养基条件而异，慢的需几周以上，一旦增殖开始，就可用反复继代培养加快细胞生殖。 继代培养可用试管或烧瓶等，大规模的悬浮培养可用传统的机械搅拌罐、气升式发酵罐。 其流程见图14-6。 外植体的选择和培养 愈伤化 摇瓶培养 大规模悬浮培养 图14-6 植物细胞大规模培养流程 植物细胞培养系统可以粗略地分为固体培养和液体培养，每种培养方式又包括若干种方 法，见图14-7。 三、植物细胞培养方法 植物细胞培养根据不同的方法可分为不同的类型。按培养对象可分为单倍体细胞培养和 原生质体培养；按培养基可分为固体培养和液体培养；按培养方式又可分为悬浮培养和固定 化细胞培养。 (1)单倍体细胞培养 主要用花药在人工培养基上进行培养，可以从小孢子(雄性生殖细汁。目前这些物质已被已知成分的营养物质所替代。在许多例子中还发现，有些抽提液对细 胞有毒性。目前仍在广泛使用的是椰子汁，在培养基中浓度是 1～15mmol／L。 目前应用最广泛的基础培养基主要有 MS、B5、E1、N6、NN 和 L2 等（表 14-3）。 2、培养基的制备 培养基中使用的无机盐、碳源、维生素和生长激素应该采用高纯度级的药品。生长激 素、2，4-D 和 NAA 等在使用前需要重结晶提纯，其酒精一水溶液要用吸附法脱色处理。对 于像 2，4-D、IAA 和 NAA 这样难溶于水的试剂，配溶液时可先溶于 2～5ml 酒精中，然后慢 慢加入蒸馏水，稍微加热，稀释至所需体积，再调节 pH。配制培养基应采用蒸馏水或者高 纯度的去离子水。在培养基配制过程中可用 0.5mol/L 的 HCl 或 0.2mol／LNaOH 调节 pH，固 体培养基加入琼脂 0.6%～1.0%，120℃蒸汽灭菌 15～20min。对于一些热敏性化合物，应该 用过滤法灭菌，如 L-谷氨酰胺、植物生长激素、椰子汁等，然后再按无菌操作加入到已灭 菌的培养基中。 由于培养基配比中有些组分量很小，种类又很多，配制起来很繁琐。因此往往把培养 基配成使用浓度的 10 倍或者 100 倍的母液，分成小瓶后冷冻保存，使用时再稀释到正常浓 度。经稀释后的培养基应放在 10℃以下冰箱中保藏。为了防止在高浓度下培养基组分间相 互作用产生沉淀，CaCl2、KI 和 EDTA 钠铁盐等要单独配制保存，使用时再稀释混合。 二、植物细胞培养流程和方法 植物细胞培养与微生物细胞培养类似，可采用液体培养基进行悬浮培养。植物组织细胞 的分离，一般采用次亚氯酸盐的稀溶液、福尔马林、酒精等消毒剂对植物体或种子进行灭菌 消毒。种子消毒后在无菌状态下发芽，将其组织的一部分在半固体培养基上培养，随着细胞 增殖形成不定形细胞团(愈伤组织)，将此愈伤组织移入液体培养基振荡培养。如植物体也可 采用同样方法将消毒后的组织片愈伤化，可用液体培养基振荡培养，愈伤化时间随植物种类 和培养基条件而异，慢的需几周以上，一旦增殖开始，就可用反复继代培养加快细胞生殖。 继代培养可用试管或烧瓶等，大规模的悬浮培养可用传统的机械搅拌罐、气升式发酵罐。 其流程见图14-6。 外植体的选择和培养 愈伤化 摇瓶培养 大规模悬浮培养 图14-6 植物细胞大规模培养流程 植物细胞培养系统可以粗略地分为固体培养和液体培养，每种培养方式又包括若干种方 法，见图14-7。 三、植物细胞培养方法 植物细胞培养根据不同的方法可分为不同的类型。按培养对象可分为单倍体细胞培养和 原生质体培养；按培养基可分为固体培养和液体培养；按培养方式又可分为悬浮培养和固定 化细胞培养。 (1)单倍体细胞培养 主要用花药在人工培养基上进行培养，可以从小孢子(雄性生殖细