Km=K2/K1=[E][S]/[ES]=KS Km值愈大，酶与底物的亲和力愈小；K值愈小，酶与底物亲和力愈大。酶与底物亲和力大，表示不需要很高的底物浓度，便可容易地达 到最大反应速度。但是K$值并非在所有酶促反应中都远小于K2,所以Ks值（又称酶促反应的底物常数）和Km值的涵义不同，不能互相代替使 用。 Km值是酶的特征性常数，只与酶的性质，酶所催化的底物和酶促反应条件（如温度、pH、有无抑制剂等）有关，与酶的浓度无关。酶的种 类不同，Km值不同，同一种酶与不同底物作用时，Km值也不同。各种酶的Km值范围很广，大致在10-1~10-6M之间。 当K3不远远小于K2和K1时，Km表示整个反应的化学平衡的常数。 如果Km值已知，任何底物浓度时酶的饱和度（形成中间产物的酶占总酶的比例，saturation fraction fEs)fEs便可计算出来。 fES=[ES][Et]=K3 [ES]/K3 [Et]=V/Vmax=[S]/Km+[S] (四)Km和Vmax的求法 如图2？所示，底物浓度曲线是矩形双曲线。 从图中很难精确地测出Km和Vmax。为此人们将米氏方程进行种种变换，将曲线作图转变成直线作图。 l.双倒数作图(double?reciprocal plot or Lineweaver?Burk plot) 将米氏方程两边取倒数，可转化为下列形式： 1 V=Km Vmax-1 [S]+1/Vmax 从图2-10可知，1/V对1/[S]的作图得一直线，其斜率是Km/V,在纵轴上的截距为1/Vmx,横轴上的截距为-1/Km。此作图除用来求Km和 Vmax值外，在研究酶的抑制作用方面还有重要价值。 Km 1 文m可+ Km 斜率中Vm Vmax 图2.10双倒数作图法 斜率=一K 恕 可 图2-11v对v川s]作图法 2.V对V〖】[S][SX)]法(Eadie?Hofstee plot) 将米氏方程经移项整理后可写成 VKm+V[S]=Vm[S] V[S]=Vm[S]-VKm 故V=Vm-KmV/[S] 以V为纵坐标对V/[S]横坐标作图，所得直线，其纵轴的截距为Vmax,斜率为Km(图2-11)。 必须指出米氏方程只适用于较为简单的酶作用过程，对于比较复杂的酶促反应过程，如多酶体系、多底物、多产物、多中间物等，还不能 全面地籍此概括和说明，必须借助于复杂的计算过程。 三、pH对反应速度的影响 酶反应介质的H可影响酶分子，特别是活性中心上必需基团的解离程度和催化基团中质子供体或质子受体所需的离子化状态，也可影响底 物和辅酶的解离程度，从而影响酶与底物的结合。只有在特定的H条件下，酶、底物和辅酶的解离情况，最适宜于它们互相结合，并发生催化 作用，使酶促反应速度达最大值，这种pH值称为酶的最适pH(optimum pH)。它和酶的最稳定pH不一定相同，和体内环境的pH也未必相同。Km=K2/K1=[E][S]/［ES］=KS Km值愈大，酶与底物的亲和力愈小；Km值愈小，酶与底物亲和力愈大。酶与底物亲和力大，表示不需要很高的底物浓度，便可容易地达 到最大反应速度。但是KS值并非在所有酶促反应中都远小于K2，所以Ks值(又称酶促反应的底物常数)和Km值的涵义不同，不能互相代替使 用。 Km值是酶的特征性常数，只与酶的性质，酶所催化的底物和酶促反应条件(如温度、pH、有无抑制剂等)有关，与酶的浓度无关。酶的种 类不同，Km值不同，同一种酶与不同底物作用时，Km值也不同。各种酶的Km值范围很广，大致在10-1～10-6M之间。 当K3不远远小于K2和K1时，Km表示整个反应的化学平衡的常数。 如果Km值已知，任何底物浓度时酶的饱和度(形成中间产物的酶占总酶的比例，saturation fraction fEs)fEs便可计算出来。 fES=［ES］／［Et］=K3［ES］／K3［Et］＝V／Vmax=[S]／Km+[S] (四)Km和Vmax的求法 如图2?所示，底物浓度曲线是矩形双曲线。 从图中很难精确地测出Km和Vmax。为此人们将米氏方程进行种种变换，将曲线作图转变成直线作图。 1.双倒数作图(double?reciprocal plot or Lineweaver?Burk plot) 将米氏方程两边取倒数，可转化为下列形式： 1／V=Km／Vmax·1／[S]+1／Vmax 从图2-10可知，1/V对1/[S]的作图得一直线，其斜率是Km/V，在纵轴上的截距为1/Vmax,横轴上的截距为-1/Km。此作图除用来求Km和 Vmax值外，在研究酶的抑制作用方面还有重要价值。 图2-10 双倒数作图法 图2-11 v对v/[s]作图法 2.V对V〖〗[S][SX)]法(Eadie?Hofstee plot) 将米氏方程经移项整理后可写成 VKm+V[S]=Vm[S] V[S]=Vm[S]-VKm 故V=Vm-KmV／[S] 以V为纵坐标对V／[S]横坐标作图，所得直线，其纵轴的截距为Vmax，斜率为Km(图2-11)。 必须指出米氏方程只适用于较为简单的酶作用过程，对于比较复杂的酶促反应过程，如多酶体系、多底物、多产物、多中间物等，还不能 全面地籍此概括和说明，必须借助于复杂的计算过程。 三、pH对反应速度的影响 酶反应介质的pH可影响酶分子，特别是活性中心上必需基团的解离程度和催化基团中质子供体或质子受体所需的离子化状态，也可影响底 物和辅酶的解离程度，从而影响酶与底物的结合。只有在特定的pH条件下，酶、底物和辅酶的解离情况，最适宜于它们互相结合，并发生催化 作用，使酶促反应速度达最大值，这种pH值称为酶的最适pH(optimum pH)。它和酶的最稳定pH不一定相同，和体内环境的pH也未必相同