离子。为防止DNA的变性和降解,操作要尽可能在低温下进行。 本实验通过匀浆、离心得到细胞核组分,然后用SDS(十二烷基硫酸钠, sodium dodecyl sulfate)裂解核膜,释放出DNA-蛋白质复合物,再加入高浓度NaCl,以增加 DNP的溶解度,然后加入氯仿一异戊醇混合液,振荡、乳化,使蛋白质变性,DNP复合 物解离,离心后,DNA溶于上层水相,蛋白质沉淀夹在水相和有机相之间得以除去 后用有机溶剂沉淀出DNA。 提取纯化后的小牛胸腺DNA用紫外分光光度法进行鉴定分析,并计算其收率和纯 度。 本实验所得的DNA样品将用于实验五的Tm测定 三、器材与试剂 器材: 1.高速冷冻离心机,50m塑料离心管,300m塑料离心管 2.食品加工机和高速分散器 3.恒温水浴 4.磁力搅拌器 5.量筒:50ml、250m、500ml 6.烧杯:100ml、500ml、1000ml 7.具塞三角瓶:250ml 8.小培养皿 9.吹风机 10.可扫描的紫外分光光度计 试剂: a.0.01M柠檬酸钠-9mg/ ml Nacl- Immol/L EDTA,pH70,300ml b.0.5M柠檬酸纳-1 mmoL/LEDTA,pH7.0,300ml c.20%SDS(公用) d.氯仿一异戊醇(24:1)混合液500ml e.95%乙醇和无水乙醇 f.丙酮 g. 0. Imol/L NaOH 四、实验步骤 1制备细胞核 (1)取小牛胸腺(或猪脾)在冰块上去除脂肪和结缔组织,切碎,称10g,放入食品204 离子。为防止 DNA 的变性和降解，操作要尽可能在低温下进行。 本实验通过匀浆、离心得到细胞核组分，然后用 SDS（十二烷基硫酸钠，sodium dodecyl sulfate）裂解核膜，释放出 DNA-蛋白质复合物，再加入高浓度 NaCl，以增加 DNP 的溶解度，然后加入氯仿—异戊醇混合液，振荡、乳化，使蛋白质变性，DNP 复合 物解离，离心后，DNA 溶于上层水相，蛋白质沉淀夹在水相和有机相之间得以除去，最 后用有机溶剂沉淀出 DNA。 提取纯化后的小牛胸腺 DNA 用紫外分光光度法进行鉴定分析，并计算其收率和纯 度。 本实验所得的 DNA 样品将用于实验五的 Tm 测定。 三、器材与试剂 器材： 1. 高速冷冻离心机，50ml 塑料离心管，300ml 塑料离心管 2.食品加工机和高速分散器 3. 恒温水浴 4. 磁力搅拌器 5. 量筒：50ml、250ml、500ml 6. 烧杯：100ml、500ml、1000ml 7. 具塞三角瓶：250ml 8. 小培养皿 9. 吹风机 10. 可扫描的紫外分光光度计 试剂： a. 0.01M 柠檬酸钠－9mg/ml Nacl－1mmol/L EDTA ，pH 7.0，300ml b. 0.15M 柠檬酸纳－1mmol/L EDTA，pH 7.0 ，300ml c. 20% SDS （公用） d. 氯仿－异戊醇（24 : 1）混合液 500ml e. 95% 乙醇和无水乙醇 f. 丙酮 g. 0.1mol/L NaOH 四、实验步骤 1.制备细胞核 ⑴ 取小牛胸腺（或猪脾）在冰块上去除脂肪和结缔组织，切碎，称 10g，放入食品