(2)离子交换树脂的转型 将树脂装入柱内,用1M甲酸钠溶液洗,直至流出液中不含氯离子(用1%硝酸银溶液 检查).最后用100ml1M甲酸洗,直至260nm处光密度值低于0.03并用蒸馏水洗至接近中性, 即可使用。 3)离子交换柱的安装取内径1.1~1.2cm的层析柱,将处理好的强碱型阴离子交换 材脂悬浮液一次倒人玻璃柱内,使树脂自由沉降至柱下部,用一小片圆滤纸盖在村脂面上, 缓慢放出液体,使液面降至滤纸片下树脂面上.(注意在整个操作过翟中防止液面低于村脂, 当液面低于村脂表面时空气将进人,在村脂柱内形成气泡,妨碍层析结果).经沉积后离子 交换树脂柱床高约10cm (4)加样将RNA水解液小心地用滴管加到离子交换树脂柱上,待样品液面降低到滤纸片 内时,用50m1蒸馏水淋洗树脂柱.碱基、核苷及其它不被阴离子交换树脂吸附的杂质均被洗 出 5)核苷酸混合物的冼脱收集蒸馏水洗脱液,在紫外分光上光度计上测260nm处光密度 待洗脱液不含紫外吸收物质(光密度值低于0.02)时,可用甲酸及甲醚钠溶液进行冼脱 依次用下列冼脱液分段洗脱,500m10.02M甲酸:;500m10.15N甲酸:500m10.0M甲酸 0.05M甲酸钠溶液(pH4.44);最后用500m10.1M甲酸+0.1M甲酸钠溶液(pH3.7 4).用部分收集器收集流出液,控制流速8ml/10分,8ml/管 (6)由层析柱所得各部分洗洗脱液的分析 以相应浓度的甲酸或甲酸钠溶液为空白对照,用紫外分光光度计测各管溶液在260m波 长处光密度值,以洗脱液体积(或管数)为横座标,光密度值为纵座标作图,分析各部分波 蜂位置 分析方法 1.核酸样品纯度的测定 Ⅰ)准确称取待测的核酸样品0.5克,加少量蒸馏水(或无离子水)调成糊状,再加适量 的水,用5一6%氨水调至pH7,定容至50m1l 2)取两支离心管,甲管内加入2皿l样品溶液和2皿l蒸馏水:乙管内加人2m样品溶液和 2皿l沉淀剂(沉淀除去大分子核酸,作为对照)。混匀,在冰浴(或冰箱)中放置30分钟 3000转/分,离心10分钟.从甲、乙两管中分别吸取0.5毫升上清液,用蒸馏水定（２）离子交换树脂的转型 将树脂装入柱内，用１Ｍ甲酸钠溶液洗，直至流出液中不含氯离子（用１％硝酸银溶液 检查）．最后用100ml 1Ｍ甲酸洗，直至260nm处光密度值低于0.03并用蒸馏水洗至接近中性， 即可使用。 （３）离子交换柱的安装取内径１．１～１．２cm的层析柱，将处理好的强碱型阴离子交换 材脂悬浮液一次倒人玻璃柱内，使树脂自由沉降至柱下部，用一小片圆滤纸盖在村脂面上， 缓慢放出液体，使液面降至滤纸片下树脂面上．（注意在整个操作过翟中防止液面低于村脂， 当液面低于村脂表面时空气将进人，在村脂柱内形成气泡，妨碍层析结果）．经沉积后离子 交换树脂柱床高约10cm． （４）加样将ＲＮＡ水解液小心地用滴管加到离子交换树脂柱上，待样品液面降低到滤纸片 内时，用50ml蒸馏水淋洗树脂柱．碱基、核苷及其它不被阴离子交换树脂吸附的杂质均被洗 出． （５）核苷酸混合物的冼脱收集蒸馏水洗脱液，在紫外分光上光度计上测260nm处光密度， 待洗脱液不含紫外吸收物质（光密度值低于0.02）时，可用甲酸及甲醚钠溶液进行冼脱． 依次用下列冼脱液分段洗脱，500ml0.02M甲酸；500ml0.15Ｎ甲酸；500ml0.01Ｍ甲酸＋ 0.05Ｍ甲酸钠溶液（ｐＨ４．４４）；最后用500ml0.1Ｍ甲酸＋0.1Ｍ甲酸钠溶液（ｐＨ３．７ ４）．用部分收集器收集流出液，控制流速8ml/10分，8ml／管． （６）由层析柱所得各部分洗洗脱液的分析 以相应浓度的甲酸或甲酸钠溶液为空白对照，用紫外分光光度计测各管溶液在260nm波 长处光密度值，以洗脱液体积（或管数）为横座标，光密度值为纵座标作图，分析各部分波 蜂位置 分 析 方 法 １．核酸样品纯度的测定 （ｌ）准确称取待测的核酸样品0.5克，加少量蒸馏水（或无离子水）调成糊状，再加适量 的水，用５一６％氨水调至ｐＨ７，定容至５０ml． （２）取两支离心管，甲管内加入2ml样品溶液和２ml蒸馏水；乙管内加人２ml样品溶液和 ２ml沉淀剂（沉淀除去大分子核酸，作为对照）。混匀，在冰浴（或冰箱）中放置３０分钟， ３０００转／分，离心１０分钟．从甲、乙两管中分别吸取０．５毫升上清液，用蒸馏水定