抗体技术 黄文翔18307130242 技术原理 Antibody 15 nm 抗体 1. Virus binding sites 抗体是宿主对体内存在的外来分子微生 物或体内其他物质刺激集体产生的蛋白 质。抗体主要由B淋巴细胞系的终末分 化细胞一一浆细胞产生的,并且循环在 血液和淋巴液众,在此与抗原结合。抗 Fab Fab 体抗原一旦形成复合物以后,主要由巨 噬细胞的吞噬作用将其由循环中清除。 抗体应答是宿主抵御外来分子和微生物 入侵的重要机制。 抗体抗原反应 抗原-抗体反应( antigen- antibody reaction)是抗原和对应抗体在一定条件下特 异结合形成可逆性抗原-抗体复合物的过程。例如一个日常生活的例子,感冒, 抗原-抗体的对抗反应。抗原抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子 上的抗原决定簇相互吸引、以及多种分子间的引力参与发生的 抗体的处理 1.抗体的储存 低温对抗体的保存至关重要 般来说,抗体最好存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于 微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会 受到明显影响。另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常我们 为了避免反复冻融,可以分装抗体。还可以加入抗微生物药物(如叠氮化钠或硫柳汞)以避免 微生物的生长。带有标记的抗体通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。但是,在冷冻 保护剂的污染物可能会影响酶的活性 向抗体储存液中加入抗氧化剂是防止抗体因氧化失效的关键步骤 氧化反应是某些酶,尤其是巯基酶的共同问题。为了防止氧化反应对抗体的破坏,我们可以 向抗体中加入一些还原剂(如二硫苏糖醇(DTT)或2-巯基乙醇(2-ME))。实验证明:越 高的pH环境和温度,有酶活性的抗体的保存时间越短。此外,加入0.1mM的铜离子,其氧化率 增加:而加入金属螯合剂EDTA可增加有效期。 蛋白质稳定剂和抗生素对抗体的稳定储存发挥着重要作用 蛋白质稳定剂可以延长大多数蛋白质在4℃或-20℃的保质期。而25-50%的甘油或乙二醇等 防冻剂有助于稳定抗体,防止在-20℃环境中形成冰晶,避免其破坏蛋白质的结构。蛋白酶抑制 剂的加入可以防止抗体发生水解反应导致其失活。而抗微生物药物,如最终浓度在0.02-0.0 (W/V)的叠氮化钠(NaN3的)或终浓度为0.01%(W/V)的硫柳汞可以抑制微生物的生长抗体技术 黄文翔 18307130242 一 技术原理 ⚫ 抗体 抗体是宿主对体内存在的外来分子微生 物或体内其他物质刺激集体产生的蛋白 质。抗体主要由 B 淋巴细胞系的终末分 化细胞——浆细胞产生的，并且循环在 血液和淋巴液众，在此与抗原结合。抗 体抗原一旦形成复合物以后，主要由巨 噬细胞的吞噬作用将其由循环中清除。 抗体应答是宿主抵御外来分子和微生物 入侵的重要机制。 ⚫ 抗体抗原反应 抗原-抗体反应(antigen-antibody reaction)是抗原和对应抗体在一定条件下特 异结合形成可逆性抗原-抗体复合物的过程。例如一个日常生活的例子，感冒， 抗原-抗体的对抗反应。抗原-抗体是免疫球蛋白分子上的抗原结合簇与抗原分子 上的抗原决定簇相互吸引、以及多种分子间的引力参与发生的。 抗体的处理 1. 抗体的储存 ⚫ 低温对抗体的保存至关重要 一般来说，抗体最好存放在≤4℃的清洁，灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于 微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在 4℃环境中 1 天或者几周内其活性不会 受到明显影响。另外，抗体中可以加入终浓度为 50％的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常我们 为了避免反复冻融，可以分装抗体。还可以加入抗微生物药物（如叠氮化钠或硫柳汞）以避免 微生物的生长。带有标记的抗体通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存 1-2 年。但是，在冷冻 保护剂的污染物可能会影响酶的活性。 ⚫ 向抗体储存液中加入抗氧化剂是防止抗体因氧化失效的关键步骤 氧化反应是某些酶，尤其是巯基酶的共同问题。为了防止氧化反应对抗体的破坏，我们可以 向抗体中加入一些还原剂（如二硫苏糖醇（DTT）或 2 - 巯基乙醇（2-ME））。实验证明：越 高的 pH 环境和温度，有酶活性的抗体的保存时间越短。此外，加入 0.1mM 的铜离子，其氧化率 增加；而加入金属螯合剂 EDTA 可增加有效期。 ⚫ 蛋白质稳定剂和抗生素对抗体的稳定储存发挥着重要作用 蛋白质稳定剂可以延长大多数蛋白质在 4℃或-20℃的保质期。而 25-50％的甘油或乙二醇等 防冻剂有助于稳定抗体，防止在-20℃环境中形成冰晶，避免其破坏蛋白质的结构。蛋白酶抑制 剂的加入可以防止抗体发生水解反应导致其失活。而抗微生物药物，如最终浓度在 0.02-0.05％ （W / V）的叠氮化钠（NaN3 的）或终浓度为 0.01％（W / V）的硫柳汞可以抑制微生物的生长