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活力单位数/毫克或摩尔酶制剂 (4)测定方法 求出速度,除以活力单位,即为单位数 速度测定常用方法 分光光度法 荧光光度法 同位素标记法 由化些寸 最常用分光光度法 直接比色分析 产物有特征吸攻峰如NAD一NADH A340nm 化学偶联分析法产物无,但可显色如淀粉→葡萄桔+C如“砖红色 酶偶联分析法 产物无,且不可显色,与另一酶促反应偶联 知萄萄糖→6砖酸葡萄糖 +NAD→6-磷酸葡萄糖酸+NAD 2、分离纯化 工业上大多采用微生物发酵的方法来杂得大量悔制剂。 优点:不受气候、地理条件的限制,动、植物体内的南大多可从微生物体内找到, 微生物繁殖快,产神量山丰富。还可以通过选育常种来提高酶的产量和用康价原料大量生产。 分离纯化的一个基太零,地纯化,结品成荆 方法:1.根据溶解度不同(盐析法、有机溶剂沉淀 等电点沉淀法 选择性沉淀法 2.根据南与杂蛋白分子大小的差别(凝胶过滤法、超离心法):3.根据,和杂蛋白与吸附剂 之间吸附与解吸附性质的个同(吸附分离法):4.根据带电性质(离子交换层折法、电泳分 离法、等电聚焦层析法):5.根据酶与杂蛋白的稳定性差别(选择性变性法):6,根据南梅与底 物、轴因子或抑制剂之间的专一性亲和作用(亲和层析法)。 酶的纯化倍数与产率计算 比活力■活力单位数毫克蛋白(氮》 纯化倍数=该次比活力/第一次比活力 产率%(回收率)=每次总活力/第一次总活力X100 酶的纯化鉴定: 聚丙烯酰胺凝胶电泳法、等电聚焦电泳法等 梅的保存:1、低温(04℃,-20℃):2、高浓度较稳定: 3、加入稳定剂:4、固定化:5,干燥。 七、核酶、抗体酶、同工酶(熟悉) 1、核酶 具有催化功能的RNA, 应用前景用于破坏病毒及癌细胞的基因表达 理论意义提出了生物大分子和生命起源的新概念,促进进化研究。 (认为分子进化过程中有一个RNA时期,现在的核酶是活化石) 2、抗体梅 具有催化功能的免疫球蛋白(抗体) 由于抗体酶具有高度底物专一性,在临床上治疗和合成立体专一性化学物 质上具有重要应用价值
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