10.将玻片从洗脱液中取出，竖直立在纸上几下，以去掉多余的液体。 11.加80-100μ1Ⅳ液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃温育15分钟。 12.将3缸用过的洗脱液倒掉，换成为用过的洗脱液，放入水浴中预 执。 13.加80-100μ1V液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃继续温育40分钟。 14.取出标本，去掉塑料薄膜，置于42-50℃洗脱液中洗涤3次，每次 5分钟。 15。将玻片从洗脱液中取出，竖直立在纸上几下，以去掉多余的液体 16.加80-100μ1Ⅱ液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃温育15分钟。 17.将3缸用过的洗脱液倒掉，换成未用过的洗脱液，放入水浴中预 热。 18.加80-100μ1Ⅲ液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃继续温育40分钟。 19.取出标本，去掉塑料薄膜，置于42-50℃洗脱液中洗涤3次，每次 5分钟。再于室温2×SSC中平衡一下。 20.玻片从中取出，竖直立在纸上晾干，加12-15μ1M液复染，盖上盖 玻片，荧光显微镜下观察结果。 (八)结果判定低倍镜下用看P(红色)的激发块找到红色的染色体 及细胞，换成油镜，用微调调清楚，再更换看FTC(绿色)的激发块观察 绿色信号（不看时随时关上荧光，以防止信号淬灭，看完后请放-20℃避光 保存片子)。 注意事项： 1本方法适用于外周血标本，如羊水或其他标本应做好杂交前预处理 2.片子变性时间由制片后时间长短而定，制片时间越长变性时间越长。 3变性及洗脱时应量取染缸内液体的温度。洗脱过程中片子勿干，以免 增加背景。 4试剂每次使用前应充分混匀，应尽量减少反复冻融次数，一经起用可 放在4℃，FITC-avidin应避光保存。 5加盖玻片时应避免产生气泡（如产生气泡，有气泡的区域将不应视为 杂交区)。 五、作业与思考 1.荧光原位杂交技术的原理是什么？ 2熟悉荧光原位杂交技术的主要步骤有哪些？ (刘京昇)3 10.将玻片从洗脱液中取出，竖直立在纸上几下，以去掉多余的液体。 11. 加 80-100μlⅣ液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃温育 15 分钟。 12. 将 3 缸用过的洗脱液倒掉，换成为用过的洗脱液，放入水浴中预 热。 13. 加 80-100μlⅤ液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃继续温育 40 分钟。 14. 取出标本，去掉塑料薄膜，置于 42-50℃洗脱液中洗涤 3 次，每次 5 分钟。 15. 将玻片从洗脱液中取出，竖直立在纸上几下，以去掉多余的液体。 16. 加 80-100μlⅡ液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃温育 15 分钟。 17. 将 3 缸用过的洗脱液倒掉，换成未用过的洗脱液，放入水浴中预 热。 18.加 80-100μlⅢ液于标本的杂交区域上，盖上塑料薄膜，杂交盒中 37℃继续温育 40 分钟。 19. 取出标本，去掉塑料薄膜，置于 42-50℃洗脱液中洗涤 3 次，每次 5 分钟。再于室温 2×SSC 中平衡一下。 20.玻片从中取出，竖直立在纸上晾干，加 12-15μlⅥ液复染，盖上盖 玻片，荧光显微镜下观察结果。 （八）结果判定 低倍镜下用看 PI（红色）的激发块找到红色的染色体 及细胞，换成油镜，用微调调清楚，再更换看 FITC（绿色）的激发块观察 绿色信号（不看时随时关上荧光，以防止信号淬灭，看完后请放-20℃避光 保存片子）。 注意事项： 1.本方法适用于外周血标本，如羊水或其他标本应做好杂交前预处理。 2.片子变性时间由制片后时间长短而定，制片时间越长变性时间越长。 3.变性及洗脱时应量取染缸内液体的温度。洗脱过程中片子勿干，以免 增加背景。 4.试剂每次使用前应充分混匀，应尽量减少反复冻融次数，一经起用可 放在 4℃，FITC-avidin 应避光保存。 5.加盖玻片时应避免产生气泡（如产生气泡，有气泡的区域将不应视为 杂交区）。 五、作业与思考 1. 荧光原位杂交技术的原理是什么？ 2.熟悉荧光原位杂交技术的主要步骤有哪些？ （刘京昇）