(二)重组DNA技术中常用的工具酶 工具酶 功 能 限制性核酸内切酶 识别特异序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA中相邻的5'磷酸基和3'羟基末端之间形成磷酸 二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶I @合成双链cDNA分子或片段连接 ② 缺口平移制作高比活探针 @DNA序列分析 ④填补3'末端 Klenow片段 又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的5'→3' 聚合、3'→5外切活性，而无5→3外切活性。常用于 cDNA第二链合成，双链DNA3'末端标记等 反转录酶 O合成cDNA @替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸5'羟基末端磷酸化，或标记探针 末端转移酶 在3'羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基(二)重组DNA技术中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸内切酶 识别特异序列，切割DNA DNA连接酶 催化DNA中相邻的5´磷酸基和3´羟基末端之间形成磷酸 二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片段连接 DNA聚合酶Ⅰ ① 合成双链cDNA分子或片段连接 ② 缺口平移制作高比活探针 ③ DNA序列分析 ④ 填补3´末端 Klenow片段 又名DNA聚合酶I大片段，具有完整DNA聚合酶I的53 聚合、35外切活性，而无53外切活性。常用于 cDNA第二链合成，双链DNA 3末端标记等 反转录酶 ① 合成cDNA ② 替代DNA聚合酶I进行填补，标记或DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸5´羟基末端磷酸化，或标记探针 末端转移酶 在3´羟基末端进行同质多聚物加尾 碱性磷酸酶 切除末端磷酸基