第十一章 基因工程与基因体外表达
第十一章 基因工程与基因体外表达
重组DNA技术定义 重组DNA技术是按照人们的意愿，在体外对DNA 分子进行重组，再将重组分子导入受体细胞，使其 在细胞中扩增、繁殖以获得DNA分子的大量拷贝。 所谓克隆是指通过无性繁殖过程所产生的与亲 代完全相同的子代群体。由于重组DNA技术实验 是对基因操作，故又称为基因克隆或DNA克隆， 同时由于这类克隆在分子水平上操作，又称为分子 克隆
重组DNA技术定义 重组DNA技术是按照人们的意愿，在体外对DNA 分子进行重组，再将重组分子导入受体细胞，使其 在细胞中扩增、繁殖以获得DNA分子的大量拷贝。 所谓克隆是指通过无性繁殖过程所产生的与亲 代完全相同的子代群体。由于重组DNA技术实验 是对基因操作，故又称为基因克隆或DNA克隆， 同时由于这类克隆在分子水平上操作，又称为分子 克隆
重组DNA技术的重大意义 重组DNA技术填平了生物种属间不可逾 越的鸿沟； 重组DNA技术缩短了进化时间； ■重组DNA技术使人能对生物进行定向改 造
重组DNA技术的重大意义 n 重组DNA技术填平了生物种属间不可逾 越的鸿沟； n 重组DNA技术缩短了进化时间； n 重组DNA技术使人能对生物进行定向改 造
重组DNA技术操作过程可形象归纳为 分 分离目的基因 切 限制酶切目的基因与载体 接 拼接重组体 转 转入受体菌 筛 筛选重组体 克隆基因的表达及检测纯化
重组DNA技术操作过程可形象归纳为 分 分离目的基因 切 限制酶切目的基因与载体 接 拼接重组体 转 转入受体菌 筛 筛选重组体 克隆基因的表达及检测纯化
限制性核酸内切酶 是一类能识别和切割DNA分子中特定碱基顺 序的核酸水解酶 命名：以限制性内切酶来源的微生物学名进行命 名。通常第一字母（大、斜)代表该酶的微生 物属名；第二三字母（小、斜)代表微生物的 种名；第四个字母代表寄主菌的株或型；
限制性核酸内切酶 是一类能识别和切割DNA分子中特定碱基顺 序的核酸水解酶 命名:以限制性内切酶来源的微生物学名进行命 名。通常第一字母（大、斜）代表该酶的微生 物属名；第二三字母（小、斜）代表微生物的 种名；第四个字母代表寄主菌的株或型；
限制性核酸内切酶的分类 I类：属于复合功能酶，兼有修饰和切割DNA两 种功能，但识别、切割位点不一致； Ⅲ类：有核酸内切酶和甲基化酶功能，但在DNA 链上特异切割点在识别位点以外： II类：能识别切割双链DNA特异序列，产生特异 的DNA片段；
Ⅰ类：属于复合功能酶，兼有修饰和切割DNA两 种功能，但识别、切割位点不一致； Ⅲ类：有核酸内切酶和甲基化酶功能，但在DNA 链上特异切割点在识别位点以外； Ⅱ类：能识别切割双链DNA特异序列，产生特异 的DNA片段； 限制性核酸内切酶的分类
Ⅱ类内切酶切割形成端口类型 1、产生平末端：在识别顺序的对称轴上， 对双链DNA同时切割。 HindⅡ GTCGAC CAGCTG
1、产生平末端：在识别顺序的对称轴上， 对双链DNA同时切割。 Ⅱ类内切酶切割形成端口类型 HindⅡ GTCGAC CAGCTG
2、产生5`端突出的粘性末端：在识别顺 序的双侧末端切割DNA双链，于对称轴 的5`末端切割。 Bam HI 52 GGATCC 3 3 CCTAGG 5
2、产生5`端突出的粘性末端：在识别顺 序的双侧末端切割DNA双链，于对称轴 的5`末端切割。 Bam HⅠ GGATCC CCTAGG 5` 3` 3` 5`
3、产生3`端突出的粘性末端 Sac I 5 GAGCTC 3八 3 CTCGAG 5
3、产生3`端突出的粘性末端 SacⅠ GAGCTC CTCGAG 5` 3` 3` 5`
少数有特殊性质的Ⅱ型酶 同功异源酶 来源不同的限制酶，识别顺序相同，切割位，点可以相 同也可以不同，这些酶称同功异源酶。 Bam HI氵 Kpn I GGATCC GGTACC CCTAGG CCATGG Bst I : Asp718 I GGATCC GGTACC CCTAGG CCATGG
同功异源酶 来源不同的限制酶，识别顺序相同，切割位点可以相 同也可以不同，这些酶称同功异源酶。 少数有特殊性质的Ⅱ型酶 GGATCC CCTAGG GGTACC CCATGG Bam HⅠ GGATCC CCTAGG GGTACC CCATGG BstⅠ Kpn Ⅰ Asp718Ⅰ