如牛血清蛋白)再包被一次，以封闭(blocking)固相上的空余间隙。另外，在检测过程中 标本须先行稀释(1：40~1：200)，以避免过高的阴性本底影响结果的判断。 3.竞争法 当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异 性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越 多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应（图S10-4)。 ◇ 孵育 洗涤 加酶标记抗 加底物显色 原和被测抗 洗涤 原混合物 包被特异性抗体 孵有 洗涤 加酶标记抗原 加底物显色 图S10-4竞争法原理 如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用 捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗 原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将 标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本 与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗 原反应。抗HBe的检测一般采用此法。 小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进 行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体 结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子 激素、药物等ELISA测定多用此法。如牛血清蛋白）再包被一次，以封闭（blocking）固相上的空余间隙。另外，在检测过程中 标本须先行稀释（1:40～1:200），以避免过高的阴性本底影响结果的判断。 3. 竞争法 当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异 性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越 多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此阳性反应呈色浅于阴性反应（图 S10-4）。 图 S10-4 竞争法原理 如抗原为高纯度的，可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质，直接包被不易成功，可采用 捕获包被法，即先包被与固相抗原相应的抗体，然后加入抗原，形成固相抗原。洗涤除去抗 原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式，可将 标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合，抗 HBc ELISA 一般采用此法。另一种模式为将标本 与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合，洗涤后再加入酶标抗体，与结合在固相上的抗 原反应。抗 HBe 的检测一般采用此法。 小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进 行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体 结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子 激素、药物等 ELISA 测定多用此法