正相色谱:固定相为极性,流动相为非极性 反相色谱:固定相为非极性,流动相为极性。用的最多,约占60~70% 固定相(柱填料) 固定相又分为两类,一类是使用最多的微粒硅胶,另一类是使用较少的高分子微球 后者的优点是强度大、化学惰性,使用pH范围大,pH=1~14,缺点是柱效较小,常用于 离子交换色谱和凝胶色谱 最常使用的全孔微粒硅胶(3~10μm)是化学键合相硅胶,这种固定相要占所有柱 填料的80%。它是通过化学反应把某种适当的化学官能团(例如各种有机硅烷),键合到 硅胶表面上,取代了羟基(一OH)而成。它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料 类型 使用微粒硅胶要特别注意它的使用pH范围是2~75,若过碱(>pH7.5),硅胶会粉 碎或溶解;若过酸(<pH2),键合相的化学键会断裂。 键合相使用硅胶作基质的优点是:①硅胶的强度大:②微粒硅胶的了孔结构和表面积 易人为控制。③化学稳定性好 硅胶(SiO2·nH2O) QH OH Si-o-Si- 重要的键合相是:硅烷化键合相,它是硅胶与有机硅烷反应的产物 最常用的键合相键型是: Si-o-Si- F i-OH+x--Si-R SiO一 R+HX R3 硅胶有机硅烷 键合相 X一Cl,CH3O,C2H5O等 R一烷:CsH17(即C8填料),C1oH21,C18H3等 R1、R2一X、CH3等 最常用的“万能柱”填料为“Cl8”,简称“ODs”柱,即十八烷基硅烷键合硅胶填 料( Octadecylsilyl,简称ODS)。这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用,它可完 成高效液相色谱70~80%的分析任务。由于Cl8(ODS)是长链烷基键合相,有较高的碳含 量和更好的疏水性,对各种类型的生物大分子有更强的适应能力,因此在生物化学分析工 作中应用的最为广泛,近年来,为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务,又发展了141 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占 60～70％。 固定相（柱填料）： 固定相又分为两类，一类是使用最多的微粒硅胶，另一类是使用较少的高分子微球。 后者的优点是强度大、化学惰性，使用 pH 范围大，pH=1～14，缺点是柱效较小，常用于 离子交换色谱和凝胶色谱。 最常使用的全孔微粒硅胶（3～10μm）是化学键合相硅胶，这种固定相要占所有柱 填料的 80％。它是通过化学反应把某种适当的化学官能团（例如各种有机硅烷），键合到 硅胶表面上，取代了羟基（－OH）而成。它是近代高效液相色谱技术中最重要的柱填料 类型。 使用微粒硅胶要特别注意它的使用 pH 范围是 2～7.5，若过碱（＞pH7.5），硅胶会粉 碎或溶解；若过酸（＜pH2），键合相的化学键会断裂。 键合相使用硅胶作基质的优点是：①硅胶的强度大；②微粒硅胶的了孔结构和表面积 易人为控制。③化学稳定性好。 硅胶 ( SiO2• n H2O) ： OH OH —Si—O—Si— 重要的键合相是：硅烷化键合相，它是硅胶与有机硅烷反应的产物。 最常用的键合相键型是： —Si—O—Si—C R1 R1 —Si—OH + X—Si—R —Si—O—Si—R + HX R2 R2 硅胶 有机硅烷 键合相 X ━ Cl，CH3O，C2H5O 等。 R ━ 烷：C8H17（即 C8 填料），C10H21，C18H37 等。 R1 、R2 ━ X、CH3 等。 最常用的“万能柱”填料为“C18”，简称“ODS”柱，即十八烷基硅烷键合硅胶填 料（Octadecylsilyl，简称 ODS）。这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完 成高效液相色谱 70～80％的分析任务。由于 C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含 量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工 作中应用的最为广泛，近年来，为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务，又发展了