生物化学:蛋白质化学 山农大生物化学与分子生物学系 第10页共20页 该反应被 Edman成功地用于氨基酸序列分析 测定原理:蛋白质多肽链N末端AA的q-氨基也可以与PITC发生上述反应生成PTH一多肽,在酸 性溶液中释放出末端的PIH-A和比原来少一个AA残基的多肽链,所得的PIH-A用层析法鉴定 即可确定肽链N末端AA的种类。剩余的肽链重复应用此方法测定其N端的第二个AA,如此重复 就可测定多肽链全部序列。目前根据此原理设计出蛋白质顺序测定仪,大大提高了蛋白质测序的 效率 Sanger反应 测定原理:因为是a-氨基参加的反应,所以DNFB只与多肽或蛋白质N端的A起反应,生成DNP一 多肽或DNP一蛋白质,当用酸水解时,所有的肽键被切开,只有DNP基仍连在N端A上,形成黄 色的DNP一AA,利用DNP-AA在有机溶剂中的溶解度与其他AA不同,可以用乙醚把DNP-AA抽提 出来,从而与其他A分开,所得DNP-AA经纸层析,从纸层析图谱上黄色斑点的位置可鉴定N端 AA的种类和数目 第三节肽 肽键与肽的概念 氨基酸的α一羧基与另一个氨基酸的α一氨基形成特殊的酰胺键,称为肽键。 氨基酸以肽键相连形成的化合物称为肽。(注:侧链基团上的氨基和羧基参与形成的 酰胺键称为异肽键。) H2N-CH oH CH-COOH H2N-CH-C-NI-CH-COOH 肽键 肽和肽键的结构及命名 )结构:肽键的结构如下图所示: 0 H3N+-c-c-Ntc-iC-N --N-C-C00 RI H R2!H; R3 R4 氨基末端 (N-未端) 肽单位肽键 氨基酸残基 羧基未端0 (C一未端)生物化学: 蛋白质化学 山农大生物化学与分子生物学系 第 10 页 共 20 页 10 该反应被 Edman 成功地用于氨基酸序列分析。 测定原理：蛋白质多肽链 N 末端 AA 的α-氨基也可以与 PITC 发生上述反应生成 PTH—多肽，在酸 性溶液中释放出末端的 PTH—AA 和比原来少一个 AA 残基的多肽链，所得的 PTH—AA 用层析法鉴定， 即可确定肽链 N 末端 AA 的种类。剩余的肽链重复应用此方法测定其 N 端的第二个 AA，如此重复 就可测定多肽链全部序列。目前根据此原理设计出蛋白质顺序测定仪，大大提高了蛋白质测序的 效率。 Sanger 反应 测定原理：因为是α-氨基参加的反应，所以 DNFB 只与多肽或蛋白质 N 端的 AA 起反应，生成 DNP— 多肽或 DNP—蛋白质，当用酸水解时，所有的肽键被切开，只有 DNP 基仍连在 N 端 AA 上，形成黄 色的 DNP—AA，利用 DNP—AA 在有机溶剂中的溶解度与其他 AA 不同，可以用乙醚把 DNP—AA 抽提 出来，从而与其他 AA 分开，所得 DNP—AA 经纸层析，从纸层析图谱上黄色斑点的位置可鉴定 N 端 AA 的种类和数目。 第三节 肽 一、肽键与肽的概念 氨基酸的α－羧基与另一个氨基酸的α－氨基形成特殊的酰胺键，称为肽键。 氨基酸以肽键相连形成的化合物称为肽。（注：侧链基团上的氨基和羧基参与形成的 酰胺键称为异肽键。） 二、肽和肽键的结构及命名 （一）结构：肽键的结构如下图所示： 氨基未端 （N-未端） ⎯− ⎯H⎯2 O→ 肽键 H H 2 N - C H - C - N - R 1 O C H - C O O H R 2 R 2 N - C H - C O O H H H O R 1 H 2 N - C H - C - O H + 肽单位 肽键 氨基酸残基 羧基未端 （C—未端） R 4 H O H O R 3 H R H 2 H O O - C C N - C - C N - C - C O O H - 3 N + C - C - N C - C - N H R 1 H