生物化学:蛋白质化学 山农大生物化学与分子生物学系 第9页共20页 两个亚氨基酸一一脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应形成黄色化合物,其它氨基 酸与茚三酮反应均生成紫色化合物。利用此反应能定性或定量测定各种氨基酸 2、 Sanger反应(与2,4二硝基氟苯反应) 在弱碱性溶液中,氨基酸的α-氨基易与2, 硝基氟苯(DNFB或FDNB)反 应,生成黄色的二硝基苯氨基酸(DNP-AA)。 R-CH-NH 2+F NO29碱性 COOH NO 2,4一二硝基氟苯(DNFB) R-CH-NH COOH NO 硝基苯基氨基酸DNP(氨基酸) 此反应最初被 sanger用于测定肽链N一未端氨基酸 3、 Edman反应(与异硫氰酸苯酯反应) 在弱碱性条件下,氨基酸的a-氨基易与异硫氰酸苯酯(PITC)反应,生成苯 异硫氰酸苯酯 H (PITC) H +CH3-N02) S=C C-H 苯乙内酰硫脲衍生物生物化学: 蛋白质化学 山农大生物化学与分子生物学系 第 9 页 共 20 页 9 两个亚氨基酸－－脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应形成黄色化合物，其它氨基 酸与茚三酮反应均生成紫色化合物。利用此反应能定性或定量测定各种氨基酸。 2、Sanger 反应（与 2，4—二硝基氟苯反应） 在弱碱性溶液中，氨基酸的α-氨基易与 2，4—二硝基氟苯（DNFB 或 FDNB）反 应，生成黄色的二硝基苯氨基酸（DNP-AA）。 此反应最初被 sanger 用于测定肽链 N—未端氨基酸。 3、Edman 反应（与异硫氰酸苯酯反应） 在弱碱性条件下，氨基酸的α-氨基易与异硫氰酸苯酯（PITC）反应，生成苯 ⎯弱碱性 ⎯ →⎯ 2，4 — 二硝基氟苯（DNFB） N O 2 N O 2 C O O H R - C H - N H 2 + F 二硝基苯基氨基酸 DNP（氨基酸） N O 2 N O 2 C O O H R - C H - N H ⎯弱碱中 ⎯ → 4 0⎯0 C H H O N C = O S = C N C - H R H H + (C H 3 - N O 2 ) N - C = O S = C C - H N H R 苯乙内酰硫脲衍生物 异硫氰酸苯酯 （PITC） R N = C = S + H 2 N - C H - C O O H