◇霉菌的细胞壁组分比较复杂,除含有几丁质外,还有其他多种组分,故要去除霉菌的 细胞壁,则需有几丁质酶与其他有关酶共同作用 植物细胞壁由纤维素、半纤维素和果胶组成,故制备植物原生质体时主要应用纤维素 酶和果胶酶 ◆为防止制备得到的原生质体破裂,应加入适当的渗透压稳定剂。如:无机盐、糖类、 糖醇等化合物。 ◆应选择对数生长期的细胞制备原生质体,以获得较高的原生质体形成率。 ◆所加进的细胞壁溶解酶的种类和浓度、酶作用温度,pH值以及作用时间等对原生质 体的制备都有明显影响,必须经过试验确定其最佳条件。 32原生质体固定化 采用包埋法制成固定化原生质体 ◆原生质体固定化一般采用凝胶包埋法。常用的凝胶有∶琼脂凝胶、海藻酸钙凝胶、角 叉菜胶和光交联树脂等。 33固定化原生质体的特点: (1)固定化原生质体由于解除了细胞壁这一扩散屏障,可增加细胞膜的通透性,有利于 氧气和营养物质的传递和吸收,也有利于胞内物质的分泌,可显著提高产率。 (2)固定化原生质体由于有载体的保护作用,具有较好的操作稳定性和保存稳定性,可 反复使用和连续使用较长的时间,利于连续化生产。在冰箱保存较长时间后仍能保持其生产 能力 (3)固定化原生质体易于和发酵产物分开,有利于产物的分离纯化,提高产品质量。 (4固定化原生质体发酵的培养基中霈要添加渗透压稳定剂,以保持原生质体的稳定性 这些渗透压稳定剂在发酵结束后,可用层析或膜分离技术等方法与产物分离。9 ◇霉菌的细胞壁组分比较复杂，除含有几丁质外，还有其他多种组分，故要去除霉菌的 细胞壁，则需有几丁质酶与其他有关酶共同作用。 ◇植物细胞壁由纤维素、半纤维素和果胶组成，故制备植物原生质体时主要应用纤维素 酶和果胶酶。 ◆为防止制备得到的原生质体破裂，应加入适当的渗透压稳定剂。如：无机盐、糖类、 糖醇等化合物。 ◆应选择对数生长期的细胞制备原生质体，以获得较高的原生质体形成率。 ◆所加进的细胞壁溶解酶的种类和浓度、酶作用温度，pH 值以及作用时间等对原生质 体的制备都有明显影响，必须经过试验确定其最佳条件。 3.2 原生质体固定化 ◆采用包埋法制成固定化原生质体。 ◆原生质体固定化一般采用凝胶包埋法。常用的凝胶有：琼脂凝胶、海藻酸钙凝胶、角 叉菜胶和光交联树脂等。 3.3 固定化原生质体的特点： (1)固定化原生质体由于解除了细胞壁这一扩散屏障，可增加细胞膜的通透性，有利于 氧气和营养物质的传递和吸收，也有利于胞内物质的分泌，可显著提高产率。 (2)固定化原生质体由于有载体的保护作用，具有较好的操作稳定性和保存稳定性，可 反复使用和连续使用较长的时间，利于连续化生产。在冰箱保存较长时间后仍能保持其生产 能力。 (3)固定化原生质体易于和发酵产物分开，有利于产物的分离纯化，提高产品质量。 (4)固定化原生质体发酵的培养基中需要添加渗透压稳定剂，以保持原生质体的稳定性。 这些渗透压稳定剂在发酵结束后，可用层析或膜分离技术等方法与产物分离