在开花期：以果实性状变异为目标的：主要在果实采收期进行，而选择早熟芽变则应在采收 前2周开始：以抗性为育种目标时，应着重抓住灾害发生之后的时期。 2.对变异的分析 在芽变育种中，当发现一个变异之后，首先要区别它是芽变还是饰变。最根本的区别方 法是直接检查遗传物质，包括细胞中染色体的倍性、数量、结构变异，以及DNA的化学测 定。但芽变育种开始选择出的变异系往往数量较多，其中有不少是属于非遗传的饰变，在众 多的变异材料中很难进行区别。所以，最好是在区别鉴别前，先采用一种办法筛除大部分显 而易见的饰变，肯定少数证据充分的遗传性优良变异，然后将剩下的一部分尚难以肯定的变 异个体，进行移栽，从而可节省土地、人力、物力和财力。 (1)变异分析分析一个变异是芽变还是饰变，首先可从以下几个方面判断：①变异 的性质如属于典型的质量性状，一般可断定是芽变。②变异体发生范围如是不同立地、不同 技术的多株变异，即可排除环境和技术的影响：对于枝变，如明显是一个扇形嵌合体，可肯 定是芽变：如果是一个单株变异，则有三种可能，或为芽变、或为饰变、或为实生变异。③ 变异的方向，凡是与环境的变化不一致的，如树冠下部或内膛处发现果实浓红色变异或花色 有异，很可能是芽变。④变异性状虽经不同年份的环境变化而表现稳定，可判断是芽变。⑤ 性状的变异程度超出基因型的反应规范之外，可能是芽变。 对于一些综合性状和数量性状，进行变异分析时为排除环境影响，可采用：①分析综合 性状的构成因素，逐个与原类型相比较，如发现其中一个质量性状或较稳定的数量性状发生 较显著而稳定的变异，则芽变的可能性较大：②比较两个性状的相关比值，例如在苹果短枝 型选种中，除度量其节间长度/粗度外，可取其相对粗度（粗/长）与对照进行比较：③对 不同立地条件下出现的相同性状的变异个体之间，可比较其各与当地对照之间的相对差异， 从而排除不同立地条件下环境的影响：④对于一些存在着基础与衍生关系的变异性状，分析 时应以受环境影响小的基础性状为主，如短枝型芽变，节间缩短是基础性状，枝条短是初级 衍生性状，枝冠矮小是较高级衍生性状，丰产稳产是高级衍生性状：⑤有些数量性状的变异， 可利用同时出现的与其具相关性的质量性状或较稳定的数量性状的变异，进行间接判断。 (2)变异的鉴别经过以上形态特征的分析之后，得到少量的性状较为明显的“准芽 变”株系或品种。为了进一步区分“准芽变”的株系或品种与原品种的差别，必须进行生理、 生化特性分析，确定其变异特性。目前主要利用分子标记对突变体进行早期鉴别。分子标记 是以生物的大分子，尤其是生物体的遗传物质一一核酸的多态性为基础的遗传标记。目前较 为广泛应用的分子标记有：限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP),随机扩增多态性(Randomly Amplified Polymorphic DNA,RAPD), 扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP),SSR(Simple Sequence Repeats),STS (Sequence Tagged Site),SCAR (Sequence Characterized Amplified Regions)等。其中以AFLP被认为是迄今为止最有效的分子标记方法，是I993年由Zabeau 和Vos创立的。它是将基因组DNA用两种限制性内切酶消化后，和两种连结子(adapter) 双链DNA连结，用2个分别能和连结子DNA退火且在3'端附加了1~2个随机碱基的选择 性引物对酶切连结后的DNA扩增：此后在进行第二次PCR(Polymerase Chain Reaction,聚 合酶链式反应)反应，所用的引物是在第一次PC℉中使用的选择性引物的3'端又附加了I~ 66 在开花期；以果实性状变异为目标的；主要在果实采收期进行，而选择早熟芽变则应在采收 前 2 周开始；以抗性为育种目标时，应着重抓住灾害发生之后的时期。 2．对变异的分析 在芽变育种中，当发现一个变异之后，首先要区别它是芽变还是饰变。最根本的区别方 法是直接检查遗传物质，包括细胞中染色体的倍性、数量、结构变异，以及 DNA 的化学测 定。但芽变育种开始选择出的变异系往往数量较多，其中有不少是属于非遗传的饰变，在众 多的变异材料中很难进行区别。所以，最好是在区别鉴别前，先采用一种办法筛除大部分显 而易见的饰变，肯定少数证据充分的遗传性优良变异，然后将剩下的一部分尚难以肯定的变 异个体，进行移栽，从而可节省土地、人力、物力和财力。 （1）变异分析 分析一个变异是芽变还是饰变，首先可从以下几个方面判断：①变异 的性质如属于典型的质量性状，一般可断定是芽变。②变异体发生范围如是不同立地、不同 技术的多株变异，即可排除环境和技术的影响；对于枝变，如明显是一个扇形嵌合体，可肯 定是芽变；如果是一个单株变异，则有三种可能，或为芽变、或为饰变、或为实生变异。③ 变异的方向，凡是与环境的变化不一致的，如树冠下部或内膛处发现果实浓红色变异或花色 有异，很可能是芽变。④变异性状虽经不同年份的环境变化而表现稳定，可判断是芽变。⑤ 性状的变异程度超出基因型的反应规范之外，可能是芽变。 对于一些综合性状和数量性状，进行变异分析时为排除环境影响，可采用：①分析综合 性状的构成因素，逐个与原类型相比较，如发现其中一个质量性状或较稳定的数量性状发生 较显著而稳定的变异，则芽变的可能性较大；②比较两个性状的相关比值，例如在苹果短枝 型选种中，除度量其节间长度／粗度外，可取其相对粗度（粗／长）与对照进行比较；③对 不同立地条件下出现的相同性状的变异个体之间，可比较其各与当地对照之间的相对差异， 从而排除不同立地条件下环境的影响；④对于一些存在着基础与衍生关系的变异性状，分析 时应以受环境影响小的基础性状为主，如短枝型芽变，节间缩短是基础性状，枝条短是初级 衍生性状，枝冠矮小是较高级衍生性状，丰产稳产是高级衍生性状；⑤有些数量性状的变异， 可利用同时出现的与其具相关性的质量性状或较稳定的数量性状的变异，进行间接判断。 （2）变异的鉴别 经过以上形态特征的分析之后，得到少量的性状较为明显的“准芽 变”株系或品种。为了进一步区分“准芽变”的株系或品种与原品种的差别，必须进行生理、 生化特性分析，确定其变异特性。目前主要利用分子标记对突变体进行早期鉴别。分子标记 是以生物的大分子，尤其是生物体的遗传物质——核酸的多态性为基础的遗传标记。目前较 为 广 泛应 用的 分子 标记 有： 限制 性片 段长 度 多态 性（ Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP），随机扩增多态性（Randomly Amplified Polymorphic DNA，RAPD）， 扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP），SSR（Simple Sequence Repeats），STS（Sequence Tagged Site），SCAR（Sequence Characterized Amplified Regions）等。其中以 AFLP 被认为是迄今为止最有效的分子标记方法，是 1993 年由 Zabeau 和 Vos 创立的。它是将基因组 DNA 用两种限制性内切酶消化后，和两种连结子（adapter） 双链 DNA 连结，用 2 个分别能和连结子 DNA 退火且在 3'端附加了 l～2 个随机碱基的选择 性引物对酶切连结后的 DNA 扩增；此后在进行第二次 PCR（Polymerase Chain Reaction，聚 合酶链式反应）反应，所用的引物是在第一次 PCR 中使用的选择性引物的 3′端又附加了 l～