七、实验报告 图示所观察到的菌体细胞的形态与革兰氏染色结果 为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不能超过24小时 3. 在下表中依次填入革兰氏染色所用染料的名称，并填上革兰氏阳性和革兰氏阴性菌在每 步染色后南体所呈的领色。在不影响革兰氏反应的前提下，哪一步可被省略？ 步骤 所用染料 菌休所导颜色 革兰氏阳性茵 革兰氏阴性菌 2 3 4 4 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确保你的操作正确、结果可靠？ 附录：细菌的芽孢染色 一、目的要求 学习芽孢染色的原理和方法 二、实验材料 1.菌种：枯草芽孢杆菌，肉汁斜面培养24h: 垫料：5%.雀绿水溶液、05%蕃红水溶液 其他 :显微镜、载玻片、接种环、香柏油 二甲苯等 三、实验原理 芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或 椭圆形。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、位置，芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的 衣据。由于芽孢壁厚、透性差、不易着色。当用结品紫单染色时，菌体呈紫色，芽孢是无色 透明 芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染 色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚，透性低，者色、脱色均较困难，当 用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时，此染料可以进入菌体及芽孢使其着色，进 入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。若再用番红复染，则菌体呈红 鱼而芽孢县绿色 四、操作步骤 1,制备菌悬液加2滴水于小试管中，用接种环挑取2~3环菌苔于试管中，搅拌均匀， 制成浓的菌悬液。 2.染色加2-3滴孔雀绿于小试管中，并使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴的 烧杯中，加热染色1520min 3. 涂片固定用接种环取试管底部菌液数环于干净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过 火焰3次温热固定。 4. 脱色水洗，直至流出的水无绿色为止。 5.复染用蕃红染液染色2~3mim,倾去染液并用滤纸吸干残液。 6.镜检干燥后用油镜观察，芽孢呈绿色，芽孢囊和营养细胞为红色。 注意：所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成芽孢为宜：取菌不宜太少七、实验报告 1. 图示所观察到的菌体细胞的形态与革兰氏染色结果； 2. 为什么革兰氏染色所用细菌的菌龄一般不能超过 24 小时？ 3. 在下表中依次填入革兰氏染色所用染料的名称，并填上革兰氏阳性和革兰氏阴性菌在每 步染色后菌体所呈的颜色。在不影响革兰氏反应的前提下，哪一步可被省略？ 步骤 所用染料 菌体所呈颜色 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 1 2 3 4 4. 当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确保你的操作正确、结果可靠？ 附录：细菌的芽孢染色 一、目的要求 学习芽孢染色的原理和方法 二、实验材料 1. 菌种：枯草芽孢杆菌，肉汁斜面培养 24h； 2. 染料：5%孔雀绿水溶液、0.5%蕃红水溶液 3. 其他：显微镜、载玻片、接种环、香柏油、二甲苯等。 三、实验原理 芽孢又叫内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或 椭圆形。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、位置，芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的 依据。由于芽孢壁厚、透性差、不易着色。当用结晶紫单染色时，菌体呈紫色，芽孢是无色 透明。 芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染 色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚，透性低，着色、脱色均较困难，当 用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时，此染料可以进入菌体及芽孢使其着色，进 入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。若再用番红复染，则菌体呈红 色而芽孢呈绿色。 四、操作步骤 1. 制备菌悬液 加 1~2 滴水于小试管中，用接种环挑取 2~3 环菌苔于试管中，搅拌均匀， 制成浓的菌悬液。 2. 染色 加 2~3 滴孔雀绿于小试管中，并使其与菌液混合均匀，然后将试管置于沸水浴的 烧杯中，加热染色 15~20min。 3. 涂片固定 用接种环取试管底部菌液数环于干净载玻片上，涂成薄膜，然后将涂片通过 火焰 3 次温热固定。 4. 脱色 水洗，直至流出的水无绿色为止。 5. 复染 用蕃红染液染色 2~3min，倾去染液并用滤纸吸干残液。 6. 镜检 干燥后用油镜观察，芽孢呈绿色，芽孢囊和营养细胞为红色。 注意：所用菌种应掌握菌龄，以大部分细菌已形成芽孢为宜；取菌不宜太少