6、染色：如果所制备的标本用于染色体的非显带分析，则将晾干的玻 片标本用Giemsa染液（用l份Giemsa原液加9份plH6.8的磷酸缓冲液混合 而成)染色5~10分钟。在自来水管下用细水轻轻冲洗晾干。 7、镜检：将所制备人染色体玻片放到显微镜下，先用低倍镜寻找染色 体分散良好的中期分裂相转换油镜仔细观察（参考第七章中染色体照片）。 (五)注意事项 1.培养箱的温度应严格控制在37±0.5℃。 2.培养基的H值应调整到7.2~7.4之间，偏酸时细胞发有不良，偏 碱时细胞会出现轻度固缩。 3。在采血或接种时，注意不要使用太多的肝素，因为肝素过多会抑制 淋巴细胞的转化，但也不宜太少，否则出现凝血现象。如果培养物中出现膜 状凝块，可轻摇培养瓶使凝块散开。4.注意盖紧培养瓶口，以免培养过程中 培养液的山发生较大变化。如果培养液变黄，说明偏酸，此时可加入无菌 的2%aHC0,溶液或另加2~3毫升培养液进行调整。 5.PA的质与量是人体淋巴细胞培养成败的关键，一般使用量为每毫 升培养液200~300微克（市售10毫克安瓿装P用2毫升生理盐水稀释， 每瓶培养物加0.2~0.3毫升)。由于不同米源和保存时间不同的PH其效价 会有差异，所以，精确的其用量应自行摸索。PHA的量也不宜过大，否则会 导致红细胞疑集。 6.所用的玻璃器皿都应十分洁净，各种试剂尽量选用分析纯的 7.配制培养液等溶液所用的双蒸水宜用玻璃蒸馏器制备。 8.离心机最好用水平式的，速度宜用1000~2000pm,如太高，沉降 在管底的细胞团不宜打散：太低，分裂相容易丢失。如果低渗后离心速度过 高，则会使分裂细胞过早破裂，在最后制成的标本中，完整分裂相过少。 9.秋水仙素的处理时间和使用浓度，应随实验的要求而异。若从能得 到足够量的中期分裂相考虑，秋水仙素的处理时间宜长些，所用的浓度宜高 些：但从能得到较为细长的染色体（便于分带）考虑，处理时间宜短些，所 用浓度宜低些。应注意，秋水仙素用量过多或作用时间过长，会导致染色体 过分收缩或着丝粒分离，甚至染色体破碎。 10.收获前的所有操作过程应保持高度的无菌概念，严防细菌和病毒的 污染。 11.低渗时间的长短关系到染色体分散的好坏，精确的时间应自行摸 索。 12.固定液应现配现用，固定应彻底，吹打要均匀，用力不要过猛，以 避免细胞破裂，染色体丢失。 13.固定剂也可用乙醇和冰酷酸混合(3：1)，但甲醇的使用较乙醇更 为广泛，因为甲醇可使标本更为清晰，但要注意的是这种固定剂应现配现用， 存放后会产生沉淀，影响固定的效果。7 6、染色：如果所制备的标本用于染色体的非显带分析，则将晾干的玻 片标本用 Giemsa 染液（用 1 份 Giemsa 原液加 9 份 pH6.8 的磷酸缓冲液混合 而成）染色 5～10 分钟。在自来水管下用细水轻轻冲洗晾干。 7、镜检：将所制备人染色体玻片放到显微镜下，先用低倍镜寻找染色 体分散良好的中期分裂相转换油镜仔细观察（参考第七章中染色体照片）。 （五）注意事项 1. 培养箱的温度应严格控制在 37±0.5℃。 2. 培养基的 pH 值应调整到 7.2～7.4 之间，偏酸时细胞发育不良，偏 碱时细胞会出现轻度固缩。 3. 在采血或接种时，注意不要使用太多的肝素，因为肝素过多会抑制 淋巴细胞的转化，但也不宜太少，否则出现凝血现象。如果培养物中出现膜 状凝块，可轻摇培养瓶使凝块散开。4.注意盖紧培养瓶口，以免培养过程中 培养液的 pH 发生较大变化。如果培养液变黄，说明偏酸，此时可加入无菌 的 2%NaHCO3 溶液或另加 2～3 毫升培养液进行调整。 5. PHA 的质与量是人体淋巴细胞培养成败的关键，一般使用量为每毫 升培养液 200～300 微克（市售 10 毫克安瓿装 PHA 用 2 毫升生理盐水稀释， 每瓶培养物加 0.2～0.3 毫升）。由于不同来源和保存时间不同的 PHA 其效价 会有差异，所以，精确的其用量应自行摸索。PHA 的量也不宜过大，否则会 导致红细胞凝集。 6. 所用的玻璃器皿都应十分洁净，各种试剂尽量选用分析纯的。 7. 配制培养液等溶液所用的双蒸水宜用玻璃蒸馏器制备。 8. 离心机最好用水平式的，速度宜用 1000～2000rpm，如太高，沉降 在管底的细胞团不宜打散；太低，分裂相容易丢失。如果低渗后离心速度过 高，则会使分裂细胞过早破裂，在最后制成的标本中，完整分裂相过少。 9. 秋水仙素的处理时间和使用浓度，应随实验的要求而异。若从能得 到足够量的中期分裂相考虑，秋水仙素的处理时间宜长些，所用的浓度宜高 些；但从能得到较为细长的染色体（便于分带）考虑，处理时间宜短些，所 用浓度宜低些。应注意，秋水仙素用量过多或作用时间过长，会导致染色体 过分收缩或着丝粒分离，甚至染色体破碎。 10. 收获前的所有操作过程应保持高度的无菌概念，严防细菌和病毒的 污染。 11. 低渗时间的长短关系到染色体分散的好坏，精确的时间应自行摸 索。 12. 固定液应现配现用，固定应彻底，吹打要均匀，用力不要过猛，以 避免细胞破裂，染色体丢失。 13. 固定剂也可用乙醇和冰醋酸混合（3：1），但甲醇的使用较乙醇更 为广泛，因为甲醇可使标本更为清晰，但要注意的是这种固定剂应现配现用， 存放后会产生沉淀，影响固定的效果