(3)安培瓶 (4)层析缸 (5)吹风材 (6)喷雾器 2.试剂 (6mol /IHCI (2)标氨基酸(ml/mL):称取亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、组氨酸 洛mg 分别溶 Flml0.01mol/L的HC溶液中，保存于冰箱 (3)展层剂：正丁醇：88%甲酸：水=15：3：2(V/V) (4)0.5%的茚三酮丙酮溶液 (5)10%异丙醇溶液 3.材料 )层析滤纸(I0cm ×10cm),普通滤纸(21cm×21cm (2)毛细管、培养皿、镊子 四、操作步骤 1.蛋白质的水解 称取0.Zg酵母粉，放进一个小安培瓶中，向瓶中加入1ml6mol/L的盐酸，于喷灯 火焰上封口。将安培瓶放入干燥箱内，在10℃下水解20h后，把安培 内的水解液倒进蒸 发皿内，将蒸发皿放于沸水浴上加热以除去水解液中的盐酸。将水解液蒸干，溶解于0.5一」 ml10%的异丙醇中。 2.纸层析法分离氨基酸 取1张10X10m的层析滤纸放在普向法纸上，用直尺和铅笔在距法纸底边2cm处 划一条平行于底边的很轻的直线做为基线。沿直线 一定的间隔做标记以指示标准氨 基酸利 蛋白质水解液的加样位置。用毛细管吸少量氨基酸样品点于标记的位置上。点样时，毛细管 口应与滤纸轻轻接触，样点直径一般控制在0,3m之内。用吹风机稍加吹干后再点下一次， 重复3次，每次的样品点应完全重合。加样完毕后，将滤纸卷成圆筒状，使基线吻合，两边 不搭接，用针和线将纸两边缝合。将点好样品的滤纸移入层析缸中（层析缸内事先加入一个 注人40ml展层剂的直径为10cm的培养皿，使液层厚度为 cm左右，盖上层析缸的盖子 20min,以保证罩内有 定蒸汽压)，采用上行法进行展层。当溶剂前沿上升到距纸上端1cm 时，取出滤纸，立即用铅笔记下溶剂前沿的位置，剪断缝线，用吹风机吹干滤纸上的溶剂。 之后用前三酮丙酮溶液均匀地喷洒在滤纸有效面上，切勿喷得过多致使斑点扩散。然后将滤 纸放入烘箱，于80℃下显色5min后取出。 五、结果处理 用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距 离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的R:值，与标准氨基酸的R:值对照，确定水解液 中含有哪些氨基酸。 六、注意事项 1.点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面（即展层时样品可能达到的部分）。 2.点样斑点不能太大（直径应小于0.3cm),防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠， 且吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。 3.展层开始时切勿使禅品点浸入溶剂中（3）安培瓶 （4）层析缸 （5）吹风机 （6）喷雾器 2．试剂 （1）6mol／L HCl （2）标准氨基酸（lml／mL）：称取亮氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、缬氨酸、组氨酸 各 lmg，分别溶于 lml 0.01mol／L 的 HCl 溶液中，保存于冰箱 （3）展层剂：正丁醇：88％甲酸：水＝15：3：2（V／V） （4）0.5％的茚三酮丙酮溶液 （5）10％异丙醇溶液 3．材料 （1）层析滤纸（10cm × 10cm），普通滤纸（21cm × 21cm） （2）毛细管、培养皿、镊子 四、操作步骤 1．蛋白质的水解 称取 0．Zg 酵母粉，放进一个小安培瓶中，向瓶中加入 l ml 6mol／L 的盐酸，于喷灯 火焰上封口。将安培瓶放入干燥箱内，在 110℃下水解 20 h 后，把安培瓶内的水解液倒进蒸 发皿内，将蒸发皿放于沸水浴上加热以除去水解液中的盐酸。将水解液蒸干，溶解于 0.5—l ml 10％的异丙醇中。 2．纸层析法分离氨基酸 取 1 张 10 × 10cm 的层析滤纸放在普遍滤纸上，用直尺和铅笔在距滤纸底边 2 cm 处 划一条平行于底边的很轻的直线做为基线。沿直线以一定的间隔做标记以指示标准氨基酸和 蛋白质水解液的加样位置。用毛细管吸少量氨基酸样品点于标记的位置上。点样时，毛细管 口应与滤纸轻轻接触，样点直径一般控制在 0.3cm 之内。用吹风机稍加吹干后再点下一次， 重复 3 次，每次的样品点应完全重合。加样完毕后，将滤纸卷成圆筒状，使基线吻合，两边 不搭接，用针和线将纸两边缝合。将点好样品的滤纸移入层析缸中（层析缸内事先加入一个 注人 40ml 展层剂的直径为 10cm 的培养皿，使液层厚度为 1cm 左右，盖上层析缸的盖子 20min，以保证罩内有一定蒸汽压），采用上行法进行展层。当溶剂前沿上升到距纸上端 Icm 时，取出滤纸，立即用铅笔记下溶剂前沿的位置，剪断缝线，用吹风机吹干滤纸上的溶剂。 之后用前三酮丙酮溶液均匀地喷洒在滤纸有效面上，切勿喷得过多致使斑点扩散。然后将滤 纸放入烘箱，于 80℃下显色 5min 后取出。 五、结果处理 用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距 离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 Rf值，与标准氨基酸的 Rf值对照，确定水解液 中含有哪些氨基酸。 六、注意事项 1．点样时要避免手指或唾液等污染滤纸有效面（即展层时样品可能达到的部分）。 2．点样斑点不能太大（直径应小于 0.3 cm），防止层析后氨基酸斑点过度扩散和重叠， 且吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。 3．展层开始时切勿使样品点浸入溶剂中