1.目的基因的取得 1.黻体系统 2.供体系统 一般有三条途径:①从适当大顾粒 的供体细胞(各种动物、植 rmmmmmyhif dnarmmmmm 物赵微生物均可)的nNA由 内切核酸酶 分2、载体的选择 内切核酸酶 (EcoRD Su(EcoRD TTAA TTAA 3、目的基因与载体 AAT DN4、重组载体引入受 体细胞 处理目前使用最广泛的 可受体微生物有大肠杆菌、 然后枯草杆菌和酿酒酵母。 DNA连接酶 体D把重组载体DNA分子 重组质粒 连接引入受体细胞的方法很 重组质粒 便可多,若以重组质粒作载 过‘体时,可以用转化的手 染色体 成段如以病毒A作为( 复制(“工程菌” 染的方法。 感受态细菌 3.受体系统 基因工程的主要原理与操作步骤1. 目的基因的取得 一般有三条途径：①从适当 的供体细胞（各种动物、植 物及微生物均可）的DNA中 分离； ②利用反转录酶的作 用由mRNA合成cDNA；③由 化学方法合成特定功能的基 因。 2、载体的选择 有了目的基因后，还必 须有符合要求的运送目 的基因的载体，以便把 它运载到受体细胞中进 行增殖和表达。 3、目的基因与载体 DNA的体外重组 用同一种限制性内切酶 处理目的基因和基因载体， 可以形成相同的粘性末端， 然后，将外源目的基因和载 体DNA混合，在添加DNA 连接酶，在一定条件下作用， 便可以使目的基因与载体经 过“退火”和连接的步骤形 成重组DNA。 4、重组载体引入受 体细胞 目前使用最广泛的 受体微生物有大肠杆菌、 枯草杆菌和酿酒酵母。 把重组载体DNA分子 引入受体细胞的方法很 多，若以重组质粒作载 体时，可以用转化的手 段；如以病毒DNA作为 重组载体时，则要用感 染的方法