复制子约有100-200Kbp。人体细胞平均每个染色体含有1000个复制子。 病毒DNA多种多样，环状或线形，双链或单链，但都是单复制子。 2、复制起点 复制起点是以一条链为模板起始DNA合成的一段序列。多数生物的复制起点，通常从 一个固定的起点开始复制，该起点是DNA呼吸作用强烈（甲醛变性实验）的区段，即经常 开放的区段，富含AT。原核一个，真核多个起点。起始序列含有一系列对称的反向重复 和某些短的成簇的保守序列。 3、复制方向 定点起始，复制方向大多数是双向的（等速进行或异速进行），形成两个复制叉，少数 是单向复制，形成一个复制叉。 a.单向 b.双向等速 c.双向异速 第二节参与DNA复制的一些酶类和蛋白质 一、大肠杆菌的DNA聚合酶 DNA聚合酶(DNA polymerase)的作用是将脱氧核苷酸连接成DNA,所用底物必须 是四种脱氧核苷三磷酸(NTP),Mg2*存在和一个DNA模板，按模板的序列将配对的脱氧 核苷酸逐个接上去，并且需要一个具有3'-OH的RNA引物或DNA的3'-OH端。使3'-OH 与合成上去的dNTP分子a-磷酸连接成3'，5'磷酸二酯键，合成方向为5'→3'，如图12-4。 从大肠杆菌纯化得到3种DNA聚合(I,Ⅱ，Ⅲ) (一)DNA聚合酶I 1955年Komberg发现了DNA聚合酶I(简称为polI),故也称为Komnberg酶，并因 此而获得诺贝尔奖金。DNA聚合酶I是一条分子质量为103X10Da的多肽链。具有多种 催化功能。若用蛋白酶轻度水解可得一个分子质量68X103Da的大片段和一个分子质量为 36X10Da的小片段，常将大片段称为Klenow片段，此片段具有两种催化活性，一为上述 的聚合功能，另一为3'→5外切酶的活性，从3端水解DNA产生3'单核苷酸。 小片段则具5→3'外切酶的活性，它能从5’→3方向一个挨一个切除，产物为5单核背 酸，或跨过若干个核苷酸再进行酶解，从5末端释放一寡核苷酸。可除去冈崎片段5端的 RNA引物和在DNA损伤修复中起重要的作用。可见，DNA聚合酶I为一条多肽链上具有 三种酶的活性，也是一种多功能酶。 但DNA聚合酶I并不是大肠杆菌DNA复制中主要的DNA合成酶，它的主要作用， 是切除RNA引物、填补空缺和DNA损伤的修复。 (二)DNA聚合酶I 由一条多肽链构成。此酶除具有聚合酶的活性外，还具有3”→5外切酶活性。它在生 物体内的确切作用不详，可能也是在DNA损伤修复中起作用，无5'一→3外切酶活性。 复制子约有 100-200Kbp。人体细胞平均每个染色体含有 1000 个复制子。 病毒 DNA 多种多样，环状或线形，双链或单链，但都是单复制子。 2、复制起点 复制起点是以一条链为模板起始 DNA 合成的一段序列。多数生物的复制起点，通常从 一个固定的起点开始复制，该起点是 DNA 呼吸作用强烈（甲醛变性实验）的区段，即经常 开放的区段，富含 A.T。原核一个，真核多个起点。起始序列含有一系列对称的反向重复 和某些短的成簇的保守序列。 3、复制方向 定点起始，复制方向大多数是双向的（等速进行或异速进行），形成两个复制叉，少数 是单向复制，形成一个复制叉。 a. 单向 b. 双向等速 c. 双向异速 第二节 参与 DNA 复制的一些酶类和蛋白质 一、大肠杆菌的 DNA 聚合酶 DNA 聚合酶（DNA polymerase）的作用是将脱氧核苷酸连接成 DNA，所用底物必须 是四种脱氧核苷三磷酸(dNTP ) ，Mg2+存在和一个 DNA 模板，按模板的序列将配对的脱氧 核苷酸逐个接上去，并且需要一个具有 3′-OH 的 RNA 引物或 DNA 的 3′-OH 端。使 3′-OH 与合成上去的 dNTP 分子 α-磷酸连接成 3′，5′磷酸二酯键，合成方向为 5′→3′，如图 12-4。 从大肠杆菌纯化得到 3 种 DNA 聚合酶(Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ )。 (一) DNA 聚合酶Ⅰ 1955 年 Kornberg 发现了 DNA 聚合酶Ⅰ(简称为 polⅠ)，故也称为 Kornberg 酶，并因 此而获得诺贝尔奖金。DNA 聚合酶Ⅰ是一条分子质量为 103X103 Da 的多肽链。具有多种 催化功能。若用蛋白酶轻度水解可得一个分子质量 68X103 Da 的大片段和一个分子质量为 36X103 Da 的小片段，常将大片段称为 Klenow 片段，此片段具有两种催化活性，一为上述 的聚合功能，另一为 3′→5′外切酶的活性，从 3′端水解 DNA 产生 3′单核苷酸。 小片段则具 5′→3′外切酶的活性，它能从 5′→3′方向一个挨一个切除，产物为 5′单核苷 酸，或跨过若干个核苷酸再进行酶解，从 5′末端释放一寡核苷酸。可除去冈崎片段 5′端的 RNA 引物和在 DNA 损伤修复中起重要的作用。可见，DNA 聚合酶Ⅰ为一条多肽链上具有 三种酶的活性，也是一种多功能酶。 但 DNA 聚合酶Ⅰ并不是大肠杆菌 DNA 复制中主要的 DNA 合成酶，它的主要作用， 是切除 RNA 引物、填补空缺和 DNA 损伤的修复。 (二) DNA 聚合酶Ⅱ 由一条多肽链构成。此酶除具有聚合酶的活性外，还具有 3′→5′外切酶活性。它在生 物体内的确切作用不详，可能也是在 DNA 损伤修复中起作用，无 5′→3′外切酶活性