实验一土壤中产醋酸菌种的分离筛选 实验目的: 1.根据一定的生产目的如抗生素或酶类的生产,建立不同的筛选模型,并从特定的样 品如土壤中筛选出高产适宜的菌株 2.加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识:学会常规选种和育种的方法,树立科 学认真仔细的态度,培养科研协作精神。 二.基本原理: 分离上样中的大部分细菌的分离程序中无需进行富集,但对某些少数细菌则要求特殊的 富集或选择技术才能很好地被分离培养。运用细菌的酶诱导性,在分离培养基中添加若干抗 生素、复杂底物及生长因子的前体物质来激活细菌某一特殊基因组,可以建立若干富集技术 同样,富集可以促进抗性的产生并维持下来。 三.培养基与仪器 1.培养基:牛肉膏蛋白胨培养基 2.仪器:全自动高压灭菌锅,培养箱,酸式滴定管 四.实验步骤 1.确定方案:首先査阅资料,了解所需菌种的生长培养特性。 2.采样:选取离地面5~15cm处的土,用小铲子取样,将采集到的土样盛入聚乙烯袋 或玻璃瓶中 3.增殖:称取0.5g土样(湿重),加到含10ml25%无菌土样浸出汁的试管中,于26℃ l5rpm条件下振荡培养25min,以适宜的样本稀释液系列稀释培养液。然后取O.lm涂布 于已添加及未添加富集底物的土浸出汁平板。26℃下皿底朝上培养4-10天,将长出的菌落 接入斜面,但应挑分离成单个的,以免不纯 4.分离:利用产物特性分离得到产目标产物的纯种。 初筛:将细菌接种到含有一定的碳酸钙的牛肉膏蛋白胨固体培养基中进行培养,如果 细菌产酸则培养基岀现混浊半透明状态,可以根据菌体产生酸溶解岀现透明圈大小初步筛选 出产酸高的菌种 复筛:将初筛菌种在斜面培养纯化后,接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中37℃深层培养 24h后。取出培养液5m1加入试管内,加0.lmoL/ NAoH液中和,然后加氯化铁液2-3滴, 摇匀,观察液色是否变为黄红色,如将试管放在火焰上煮沸,有无红褐色沉淀生出,根据所 消耗的NaOH量确定产物醋酸的具体生成量。 五.实验结果 株 2 6 NaOH的消耗量(m) 醋酸的生成量(ml) 反应液颜色变化 六.思考题 如果培养中有其它种挥发酸共存,应采用什么方法来测定醋酸的生成量?实验一 土壤中产醋酸菌种的分离筛选 一．实验目的： 1．根据一定的生产目的如抗生素或酶类的生产，建立不同的筛选模型，并从特定的样 品如土壤中筛选出高产适宜的菌株。 2．加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识；学会常规选种和育种的方法，树立科 学认真仔细的态度，培养科研协作精神。 二．基本原理： 分离上样中的大部分细菌的分离程序中无需进行富集，但对某些少数细菌则要求特殊的 富集或选择技术才能很好地被分离培养。运用细菌的酶诱导性，在分离培养基中添加若干抗 生素、复杂底物及生长因子的前体物质来激活细菌某一特殊基因组，可以建立若干富集技术。 同样，富集可以促进抗性的产生并维持下来。 三．培养基与仪器 1．培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基 2．仪器：全自动高压灭菌锅，培养箱，酸式滴定管 四．实验步骤 1. 确定方案：首先查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 2. 采样：选取离地面 5～15 cm 处的土，用小铲子取样，将采集到的土样盛入聚乙烯袋 或玻璃瓶中。 3. 增殖：称取 0.5g 土样（湿重），加到含 10ml 25%无菌土样浸出汁的试管中，于 26℃、 150rpm 条件下振荡培养 25min，以适宜的样本稀释液系列稀释培养液。然后取 0.1 m1 涂布 于已添加及未添加富集底物的土浸出汁平板。26℃下皿底朝上培养 4—10 天，将长出的菌落 接入斜面，但应挑分离成单个的，以免不纯。 4. 分离：利用产物特性分离得到产目标产物的纯种。 初筛：将细菌接种到含有一定的碳酸钙的牛肉膏蛋白胨固体培养基中进行培养，如果 细菌产酸则培养基出现混浊半透明状态，可以根据菌体产生酸溶解出现透明圈大小初步筛选 出产酸高的菌种。 复筛：将初筛菌种在斜面培养纯化后，接到牛肉膏蛋白胨液体培养基中 37℃深层培养 24 h 后。取出培养液 5m1 加入试管内，加 0.1moL/LNaOH 液中和，然后加氯化铁液 2—3 滴， 摇匀，观察液色是否变为黄红色，如将试管放在火焰上煮沸，有无红褐色沉淀生出，根据所 消耗的 NaOH 量确定产物醋酸的具体生成量。 五．实验结果 菌 株 1 2 3 4 5 6 NaOH 的消耗量（ml） 醋酸的生成量（ml） 反应液颜色变化 六．思考题 如果培养中有其它种挥发酸共存，应采用什么方法来测定醋酸的生成量？